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目的：癫痫（Epilepsy，EP）是一组由不同病因引起的，脑部神经元高度同步化，且常具有自限性的异常放电所致，以发作性﹑短暂性﹑重复性及通常为刻板性的中枢神经系统功能失常为特征的综合征。临床上，仍以抗癫痫药物（Antiepileptic drug，AED）为主要的治疗手段。苯妥英钠（Phenytoin sodium，PHT-Na）是临床上常用的AED，也是抗癫痫大发作的首选药物。七十味珍珠丸(Rannasangpei，RNSP)是最有代表性的名贵藏成药之一，具有安神、镇静等功效，有时也用于抗癫痫治疗。近年，抗癫痫药物造成肝损伤的报道逐渐增加，尤其是联合用药更增加了肝损伤的风险。肝细胞凋亡被认为是药物性肝损伤基本机制之一。在细胞凋亡的级联反应中，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)被称为“凋亡执行者”；Fas蛋白在死亡受体介导的凋亡途径中起着非常重要的作用。本实验通过灌胃法给予SD大鼠苯妥英钠及七十味珍珠丸，并运用免疫组织化学方法测定SD大鼠肝组织内caspase-3及Fas蛋白表达水平，探讨苯妥英钠及七十味珍珠丸对大鼠肝细胞凋亡的影响以及其可能的机制，为药物的安全性基础研究提供依据，进一步指导临床用药，减少药物不良反应，提高生活质量。方法：1动物及分组：10周龄清洁级健康雄性成熟SD大鼠40只，实验起始体重200±20g。随机分为苯妥英钠组（PHT组），七十味珍珠丸组（RNSP组），苯妥英钠+七十味珍珠丸组（PHT+RNSP组），正常对照组(NS组)，每组10只。各组再随机分为两个亚组即10天亚组（PHT-10组﹑RNSP-10组﹑PHT+RNSP-10组﹑NS-10组）和20天亚组（PHT-20组﹑RNSP-20组﹑PHT+RNSP-20组﹑NS-20组），每亚组5只，分别喂养10天、20天。2实验干预：PHT组﹑RNSP组﹑PHT+RNSP组分别按成人体重平均计量的25倍用自制的灌胃器进行药物干预，每天两次；生理盐水组给予等量生理盐水，每天两次。3肝组织石蜡切片制作：各组大鼠在药物干预结束后24小时内经10%的水合氯醛（0.35ml/100g）麻醉，4%多聚甲醛灌注固定，打开腹腔取肝左叶组织，体积块约1cm3，迅速放入4%多聚甲醛固定液中，24小时后经脱水﹑透明﹑石蜡包埋﹑切片制作石蜡切片。4HE染色：石蜡切片经苏木素-伊红染色后，光镜观察各组肝脏组织学改变。5凋亡的检测：免疫组织化学法检测caspase-3及Fas在肝细胞的表达情况，并分别计算光镜下阳性表达的细胞率。6统计处理：应用SPSS13.0统计软件行方差分析，用One-Way ANOVA检验比较多组间均数，P<0.05为差异有统计学意义，各组均数间用SNK检验两两比较。结果：1HE染色1.1除PHT-20组以外各组大鼠肝组织切片中可见肝脏基本结构正常：肝细胞以中央静脉为中心向四周辐射状排列，肝索﹑肝窦形态正常；肝细胞呈多边形，细胞分界清晰，细胞核大而圆，呈蓝色或蓝紫色，部分有双核或多倍体核，核仁1-2个，胞质呈粉红色，染色均匀。1.2PHT-20组可见少量细胞空泡变性及胞质嗜酸性增强，但未观察到核皱缩、凋亡小体等典型凋亡特征。2凋亡检测结果：caspase-3在肝组织中表达阳性的细胞显示为棕黄色或棕褐色，主要在细胞的胞浆内表达，部分可在细胞核表达；Fas在肝组织中表达阳性的细胞显示为棕黄色，可在细胞膜和（或）细胞浆内表达，以中央静脉周围表现明显。2.1各10天亚组中caspase-3﹑Fas表达阳性细胞率组间比较均无显著差异。2.2各20天亚组中caspase-3﹑Fas表达阳性细胞率比较：RNSP-20组与NS-20组比较无显著差异；PHT-20组较RNSP-20组﹑NS-20组明显升高（P<0.05）；PHT+RNSP-20组较RNSP-20组﹑NS-20组明显升高（P<0.05）；PHT-20组较PHT+RNSP-20组明显升高（P<0.05）。2.3各干预组中10天与20天亚组caspase-3﹑Fas表达阳性细胞率比较：RNSP-20组与RNSP-10组及NS-20组与NS-10组比较无显著差异；PHT-20组较PHT-10组明显升高（P<0.05）；PHT+RNSP-20组较PHT+RNSP-10组明显升高（P<0.05）。结论：1HE染色观察肝组织的大体结构，发现除PHT-20组以外各组动物肝细胞形态正常，结构排列整齐，说明大鼠口服RNSP及PHT与RNSP合用后肝脏的大体结构未受到明显影响；PHT-20组可见少量细胞空泡变性及嗜酸性增强，说明大鼠长期口服苯妥英钠后轻度影响肝细胞形态。2caspase-3和Fas在肝组织中的表达情况2.1PHT-20组表达caspase-3和Fas阳性的细胞率较NS-20组﹑PHT-10组均明显升高，说明随着服药时间的延长，苯妥英钠可促进肝细胞的凋亡，提示苯妥英钠引起肝脏不良反应可能由于细胞凋亡增加，其机制可能与Fas介导的死亡受体凋亡途径有关。2.2RNSP组表达caspase-3和Fas阳性的细胞率较NS组均未见明显差异，说明七十味珍珠丸对肝细胞凋亡无明显影响。2.3PHT-20组表达caspase-3和Fas阳性的细胞率较PHT+RNSP-20组均明显升高，说明七十味珍珠丸一定程度上减弱了苯妥英钠诱导肝细胞凋亡的作用，提示七十味珍珠丸可能在苯妥英钠致肝脏不良反应中起到一定的保护作用。