布鲁氏菌病是由胞内寄生革兰氏阴性菌-布鲁氏菌引起的一种人畜共患病。作为一种重要的人畜共患病,布鲁氏菌病给人类健康和畜牧业的发展带来了巨大危害。长期以来,因为现有疫苗缺乏诊断标记以及尚未开发出有效的鉴别诊断抗原,导致疫苗免疫动物和临床患病动物难以鉴别,使患病动物在自然群体中长期存在,阻碍动物布鲁氏菌病的根除和净化。所以迫切需要加强安全、有效、可鉴别疫苗的研究以及对现有检测诊断技术的改进。　　 在国内外研究的基础上,从16M膜蛋白中选取9个蛋白,分别为OMP31、BP26、L7/L12、BCSP31、Dnak、cuznSOD、GroEL、GroES和P39。利用PCR扩增方法获得目的基因,用凝胶回收试剂盒回收纯化目的片段。将限制性内切酶NdeI、XhoI双酶切后的目的片段与同样双酶切的表达载体连接,转化DH5a感受态细胞,并通过PCR扩增、酶切鉴定和序列测定鉴定重组质粒,结果表明9个重组表达质粒成功构建,且重组质粒中携带的目的基因编码框完全正确。成功转化Rosetta感受态细胞,获得9个转化菌株,然后摸索含有重组质粒的表达菌株在不同收菌时间、不同IPTG浓度诱导下目的蛋白表达情况,SDS-PAGE电泳检测结果显示目的蛋白在大肠杆菌中获得了大量表达。用临床牛布鲁氏菌阳性血清进行Western-blot分析,9种表达蛋白均发生了阳性反应。对表达产物用Ni螯合亲和层析法进行纯化,并将纯化的重组蛋白作为包被抗原,用临床牛布鲁氏菌阳性血清为一抗,用HRP标记的羊抗牛IgG为二抗,最后建立了以BP26蛋白为抗原检测布鲁氏菌抗体的间接ELISA方法,阳性血清检出率为96％,验证了该蛋白良好的免疫原性以及作为诊断抗原的潜力。　　 将纯化的His-OMP31、His-BP26、His-L7/L12、His-BCSP31、His-Dnak、His-cuznSOD、His-GroEL、His-GroES、His-P39蛋白与佐剂乳化后背部皮下免疫小鼠,初免使用完全弗氏佐剂,再免使用不完全弗氏佐剂。结果证明上述重组蛋白均能产生一定程度的免疫保护力,其中OMP31、BP26、GroEL、GroEs、P39蛋白免疫保护效果较好,该结果为布鲁氏菌亚单位疫苗或DNA疫苗的研究开发奠定了一定的基础。