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维生素E琥珀酸酯(RRR-α-tocopherylsuccinate;vitamin Esuccinate,VES)是天然维生素E的衍生物,能够选择性抑制多种肿瘤细胞的生长而对正常细胞不产生毒性作用。本课题在已有结果的基础上,研究VES诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中线粒体的作用及其调控机制。
通过MTT法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度。用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色观察细胞凋亡的发生。用线粒体特异性荧光染料MitoTrackerRedCMXRos染色观察线粒体膜电位(△ψm)的改变。用Westernblotting法检测VES对SGC-7901细胞中细胞色素c水平及分布的影响,以及VES对Bax、Bid和Bcl-2蛋白表达的影响。结果表明,VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度为101.45μg/mL,可以通过诱导SGC-7901细胞发生凋亡来抑制其生长。VES可以使线粒体通透性发生改变,导致△ψm降低。用Westernblotting法检测到VES对SGC-7901细胞中总细胞色素c表达水平没有影响,但能使细胞色素c从线粒体膜间腔释放到胞浆。VES可以使Bax表达水平升高,并且从胞浆转移到线粒体;使Bcl-2表达水平下降;使Bid裂解成具有活性的形式tBid。综上,VES可以通过线粒体途径诱导SGC-7901细胞发生凋亡,并通过Bax、Bid和Bcl-2蛋白调节线粒体功能。同时也提示,在VES诱导SGC-7901细胞发生凋亡的过程中,Fas信号途径可以通过tBid与细胞凋亡的线粒体途径相互联系,有效地放大凋亡信号。本课题进一步完善了VES抑制人胃癌作用的分子机制,为VES的开发与应用提供科学依据。