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研究背景 蛋白转导技术是指利用蛋白转导作用域将与之共价结合的化合物、肽、反义肽核酸或与之融合表达的全长蛋白质通过非受体依赖、非转运蛋白依赖方式运送至细胞内的一种技术。蛋白转导作用不是通过全长蛋白发生的,而是依赖于长约10～16个氨基酸残基的富含碱性氨基酸残基的在生理pH值条件下带净正电荷的氨基酸序列,该序列即被称为蛋白转导作用域。最近研究表明蛋白转导技术不仅可显著提高药物进入细胞的效率,而且可作为肿瘤基因治疗的辅助手段来提高对肿瘤组织的杀伤效率,更被用来引导特定抗原进入MHCI类分子依赖的抗原提呈途径并能显著增强肿瘤多肽疫苗和基因疫苗的免疫效能,然而目前尚无研究阐明蛋白转导功能域的转导能力与其对基因疫苗免疫效能的增强能力之间的相互关系。 目的 自行设计并制备重组腺病毒介导的、针对hTERT I540表位的基因疫苗并对其体外加载树突状细胞后诱发抗肿瘤免疫的能力进行评价,比较具有不同蛋白转导能力的蛋白转导功能域对诱发抗肿瘤免疫力的影响。 方法和结果 1、根据hTERT I540表位、HIV-1 TAT-PTD和人工合成的PTD4的氨基酸序列,设计1540-PTD和1540-PTD4并根据人类偏爱密码子反翻译(back-translation)为基因序列,掺入kozak序列,获得真核表达读框。设计6条寡聚脱氧核糖核苷酸链,经磷酸化、退火并连接后克隆至pSP72载体,获得pSP72-I540-PTD和pSP72-I540-PTD4。双酶切鉴定和DNA测序均证实成功获得1540-PTD和I540-PTD4真核表达读框。 2、将I540-PTD和I540-PTD4真核表达读框亚克隆至穿梭质粒pDC315,经双