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研究目的:探讨硼中子俘获疗法(boron neutron capture therapy,BNCT)对人黑色素瘤A375细胞的杀伤机制,同时建立人脑黑色素瘤细胞裸小鼠动物模型,为进行硼中子俘获疗法体内动物实验研究奠定基础。研究方法:将处于对数生长期的A375细胞株进行实验分组,设:(1)对照组,A375细胞不进行任何照射。(2)γ射线照射组,为60CO照射处于对数生长期的A375细胞,应用剂量分别为2Gy和4Gy。(3)医院中子照射器(In-Hospital Neutron Irradiator, IHNI-1)组,为将处于对数生长期的A375细胞直接用IHNI-1产生的中子进行照射,应用剂量分别为2Gy和4Gy。(4)BNCT组,为将处于对数生长期的A375细胞放入5mmol/l的含硼化合物二羟基苯丙氨酸硼(boronophenylalanine, BPA)果糖复合物中,孵育后用IHNI-1产生的中子进行照射,应用剂量分别为2Gy和4Gy。本实验应用感应耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP-AES)检测人黑色素瘤细胞株A375吸收BPA的情况;采用IHNI-1对含硼(boron-10,10B)A375细胞进行照射;利用MTT法检测A375细胞增殖率,流式细胞分析技术检测A375细胞凋亡情况,Western blot检测A375胞质内细胞色素c和caspase-9的水平;最后将处于对数生长期的人黑色素瘤细胞A375细胞株接种于BALB/c裸小鼠颅内,常规HE和免疫组织化学染色,然后用普通光镜观察移植瘤细胞的形态特征。结果:(1)黑色素瘤A375细胞株吸收10B浓度24小时至最高,可达2.884±0.148μg/107细胞,超过24小时10B浓度出现开始下降的趋势。(2)单纯BNCT对黑色素瘤A375细胞的杀伤作用明显强于γ射线照射。(3)对富含10B的黑色素瘤A375细胞,经BNCT后其生存比例和增殖率较其他各组显著下降。同时发现黑色素瘤细胞胞质内细胞色素c水平明显上升,caspase-9水平显著增加。(4)A375细胞可以成功种植于BALB/c裸小鼠颅内,对脑内模型常规HE检查均见有肿瘤生长,成瘤率达100%,成功建立了黑色素瘤颅内裸小鼠模型。结论:BNCT对人黑素瘤细胞株A375具有明显的增殖抑制及诱导凋亡的作用;BNCT杀伤黑色素瘤细胞的机制可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡;人脑黑色素瘤细胞动物模型的建立可以为以后BNCT的体内实验提供理想的动物模型。