抑制miRNA-124表达在脊髓缺血再灌注损伤中的作用

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目的:脊髓缺血所引起的截瘫或轻瘫,是主动脉弓、降主动脉、胸腹主动脉手术(包括腔内修复术)严重并发症。尽管手术技术和围手术期管理不断精进,但仍不能完全预测和预防,脊髓缺血再灌注损伤的分子机制尚未研究透彻。细胞凋亡和线粒体自噬广泛参与缺血再灌注损伤的病理生理过程,且缺血再灌注引起miRNAs表达广泛而深刻的改变。该部分检测大鼠脊髓缺血再灌注损伤后miRNA-124表达水平;凋亡相关蛋白p53,iASPP;线粒体自噬蛋白Beclin-1,LC3-Ⅱ的表达水平。  方法:Wistar雄性大鼠50只,随机分为5组,n=10。假手术组(S组):开胸不阻断胸降主动脉;缺血再灌注6小时组(R6组):开胸阻断胸降主动脉14 min,再灌注6h;缺血再灌注12小时组(R12组):开胸阻断降胸主动脉14 min,再灌注12h;缺血再灌注24小时组(R24组):开胸阻断胸降主动脉14 min,再灌注24 h;缺血再灌注48小时组(R48组):开胸阻断胸降主动脉14 min,再灌注48h。R48组于术前、再灌注6h、12h、24h和48h5个时间点进行后肢运动功能评分。每组按再灌注时间点取腰4-6节段脊髓组织,进行HE染色、Nissl染色、TUNEL染色和透射电镜检查。平行实验:Wistar雄性大鼠50只,按上述分组方法随机分为5组,n=10。取腰4-6节段脊髓组织,Real-time PCR检测miRNA-124表达,Westernblot检测p53、iASPP、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达。  结果:运动功能评分显示R48组在再灌注6小时以内,得分均为6分,完全瘫痪。随再灌注时间的延长,部分大鼠后肢运动功能有所恢复,以再灌注早期6小时瘫痪最为严重。组织学检查:S组脊髓前角正常,未见坏死神经元;R6组、R12组、R24组、R48组均见损伤神经元,以再灌注6小时损伤最为严重。透射电镜观察到正常线粒体及线粒体自噬现象,TUNEL染色观察到细胞凋亡。检测miRNA-124在R6组表达升高,R12组、R24组、R48组差异无统计学意义。Western blot检测,在R6组p53蛋白表达升高,iASPP蛋白表达降低,Beclin-1蛋白表达降低,LC3-Ⅱ蛋白表达降低,R12组、R24组、R48组差异无统计学意义。  结论:脊髓缺血再灌注6小时损伤严重,观察到缺血脊髓中存在细胞凋亡及线粒体自噬。miRNA-124、p53、iASPP、Beclin-1和LC3-Ⅱ在脊髓缺血中表达,且于再灌注6小时改变显著,时间上具有一致性。
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