TPA在膨体聚四氟乙烯(e-PTFE)人造血管重建肺动脉研究中表达的意义

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目的:通过建立肺动脉、胸主动脉及下腔静脉人造血管置换的动物模型,比较肺循环与体循环中人造血管内膜的组织形态以及TPA mRNA及蛋白表达,从而探索不同血流环境下TPA在人造血管的内皮细胞表达的意义。方法:27只实验猪,根据随机对照原则分为三组:肺动脉置换组(即膨体聚四氟乙烯(e-PTFE)人造血管重建肺动脉组),n=9;胸主动脉置换组(即膨体聚四氟乙烯(e-PTFE)人造血管重建胸主动脉组),n=9下腔静脉置换组(即膨体聚四氟乙烯(e-PTFE)人造血管重建下腔静脉组),n=9;每血管组再分为2周、3月、6月三个时间点亚组,每个时间点组3只实验猪;建立人造血管置换动物模型后积极术后护理并由专业饲养人员常规饲养。于术后2周、3月、6月分别进行多普勒彩色超声以及人工血管取材并测量所置换血管的狭窄程度、有无血栓形成等。取材肉眼观、光学显微镜、扫描电镜等方法分析不同环境下人造血管内皮化程度、内皮细胞超微结构。采用免疫组化方法分别检测各组人造血管内皮细胞TPA表达情况;通过Western Blot检测各组人造血管内皮细胞TPA蛋白水平;通过qRT-PCR检测各组人造血管内皮细胞TPAmRNA水平。各组检测结果分别进行统计学分析。结果:1、各组实验猪术后均存活,状态良好,动物模型均建立成功。2、血管彩超结果示肺动脉组、胸主动脉组心功能均正常、管腔内未探及血栓;下腔静脉组有明显血栓形成,且下腔静脉增宽,部分可见腹水声像。3、肉眼直接观察:取材后的人造血管2周在肺动脉组、胸主动脉组均可见血栓形成,但人造血管管径狭窄未超过50%;术后3月、6月各组人造血管未见血栓;而下腔静脉组2周时可见血栓,同时血管管径狭窄超过度50%,在3月、6月时也可见管壁附着血栓,但6月较少。4、形态学观察结果,HE染色:各组置入的人造血管ECs生长正常,未见异形细胞生长或有肿瘤细胞生长;扫描电镜:胸主动脉中可以看到新生的内皮细胞为长纺锤形,在肺动脉中可见新生的内皮细胞为长椭圆形、梭形,而在剪切力低的下腔静脉中新生的内皮细胞为类圆形,呈铺路石样,动脉内皮细胞排列较紧密而静脉内皮细胞排列相对疏松;免疫组织化学:可见用DAPI染料所染的ECs细胞核呈现出椭圆形、多边形的蓝色区域。594染料所染红色区域为TPA的蛋白,可见其在细胞胞浆内表达。随时间推移,各组的TPA表达均有明显的减少趋势。5、分子生物学检测结果,qRT-PCR检测TPAmRNA表达的水平:肺动脉组VS胸主动脉无统计学意义(P>0.05);下腔静脉组VS肺动脉组、下腔静脉组VS胸主动脉有统计学意义(P<0.05); Western Blot检测TPA蛋白的表达水平:肺动脉组VS胸主动脉无统计学意义(P>0.05);术后2周、3月,下腔静脉组VS肺动脉组、下腔静脉组VS胸主动脉有统计学意义(P<0.05);术后6月,下腔静脉组VS肺动脉组、下腔静脉组VS胸主动脉无统计学意义(P>0.05)。结论:1、置入动物体内的e-PTFE人造血管因血栓形成造成管腔狭窄,影响血管通畅性。肺动脉组和胸主动脉组置入人造血管其通畅性接近,但下腔静脉组置入的人造血管与两者相比其通畅性差。2、肺动脉和胸主动脉置入人造血管ECs生长形态相似,长轴方向与血液流动方向一致。但是,下腔静脉置入人造血管与其相比血管ECs形态显著差异细胞生长无明显的方向性。3、肺动脉和胸主动脉置入人造血管ECs分泌TPA水平较下腔静脉置入人造血管组高。术后2周、3月肺动脉和胸主动脉相比VECS分泌TPA水平无差异,均比下腔静脉组分泌TPA水平高,术后6月各组TPA表达水平接近。
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