免疫毒素是一类特异杀伤肿瘤细胞的药物，能以抗体或细胞因子为导向载体(该抗体或细胞因子能与肿瘤细胞表面特异表达的抗原或受体结合)同毒素相连，对肿瘤细胞进行特异杀伤的嵌合蛋白。正电性抗菌肽由于其独特的细胞毒机制日益引起人们的关注，而蜂毒溶血肽作为其中典型的一种，具有多种生理活性。本文以大肠杆菌为宿主重组表达Melittin；以Melittin为毒性部分，RGD(精-甘-天冬氨酸三肽)为靶向部分，构建膜毒性免疫毒素RGD-Mel；并用pET-30a为表达载体，对嵌合蛋白进行了重组融合表达，初步检测了该嵌合蛋自的体外活性。本研究得到的主要结果如下： 从处于活跃表达蜂毒溶血肽时期的中华蜜蜂工蜂毒腺中提取了总RNA，用TaqDNA聚合酶通过RT-PCR获得了中蜂Melittin成熟区的cDNA。在实验过程中发现，与在37-42℃用AMV进行反转录相比，在较高温度下用Taq DNA聚合酶进行反转录有利于获得正确、完整的cDNA。 用pUC18载体构建的p13CT克隆载体克隆了中蜂Melittin成熟区的cDNA，测序结果显示中蜂Melittin成熟区序列与意蜂的相比，中蜂在第33位发生了一个碱基的差异，但这一变异对氨基酸序列无影响，即中蜂与意蜂Melittin的氨基酸序列完全一致。 本文采用基因工程的方法，将RGD与中蜂Melittin连接，以大肠杆菌为重组表达宿主，pET30a为表达载体，对该嵌合蛋白进行了高效表达，并分离纯化了该融合蛋白。经体外细胞实验初步证明该融合蛋白有明显的肿瘤杀伤作用：当天然蜂毒素的浓度达到5.0μg/mL时，其肿瘤抑制率为39.6％，RGD-Mel在浓度为5.0 μg/mL时，其肿瘤抑制率已达到45.5％，且RGD-Mel浓度为3.0μg/mL时的肿瘤抑制率已相当于天然蜂毒素在浓度为5.0μg/mL时的抑制率。 重组蛋白RGD-Mel是一种膜毒性抗肿瘤免疫毒素，在体外表现了明显的肿瘤杀伤活性，但尚需进行体内试验以进一步验证其抗肿瘤活性。本研究在肿瘤的导向治疗和临床方面将有很大的潜在应用价值。