稻瘟病菌【Magnaporthe grisea】附着胞是稻瘟病菌在侵入水稻组织前形成的一种侵染结构,是稻瘟病菌侵染过程中的一个关键环节。了解稻瘟病菌附着胞阶段基因表达的状况对于弄清附着胞的形成、发育和侵入机制具有重要意义。本论文研究了形成24小时的稻瘟病菌附着胞基因表达及与茵丝、孢子基因表达的差异,为寻找参与稻瘟病菌附着胞形成、发育过程或穿透过程的关键基因打下了基础。主要研究结果如下: 1、 本论文采用投影胶片诱导稻瘟病菌附着胞形成,发现分生孢子以1× 10~6个/mL接种时,效果最好,附着胞形成率达到96.5%;菌丝及分生 孢子作对照,分别提取附着胞、菌丝和分生孢子总RNA,浓度分别达 到1.42μg/μl和5.09μg/μl。 2、 本论文借助SMART技术和长片段PCR技术将稻瘟病菌附着胞与稻瘟 病菌菌丝/孢子的RNA反转录cDNA,分子量范围都在200bp~6Kb之间: 其中附着胞cDNA主要分布在500bp与5kb之间,菌丝/孢子cDNA主要 分布在400bp到2kb之间。 3、 本论文利用SSH技术构建稻瘟病菌发育24小时附着胞与稻瘟病菌菌 丝/孢子cDNA的差减文库。重组质粒径测序获得250条EST序列。这 些EST序列经contig组装后,得到155条非冗余EST序列。155条非冗 余EST序列在 Magnaporthe grisea Database用blast进行相似性联配,并 祝个比较分析EST序列对应的基因组DNA序列,确定这155条EST序列对 应着142个基因。RT-PCR验证结果表明共有71个基因(50%)在稻瘟病 军附着胞中特意表达。再NCBI上的EST序列相似性联配(blast)结果 表明:58%的EST序列(82条)具有同源序列,其余42%EST序列(60条) 没有找到同源序列。上述结果表明本cDNA文库在筛选稻瘟病菌附着胞 特异表达基因取得了很好的结果。