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端粒酶是一种核蛋白复合物,具有维持和延长真核细胞染色体末端端粒结构、调节细胞增殖潜能和寿命的功能。由于在90%的人恶性肿瘤细胞中涉及端粒酶的活化而在绝大多数正常体细胞中检测不到端粒酶的活性,故近来端粒酶己成为颇具吸引力的肿瘤治疗的分子靶标。具有活性的端粒酶由一个RNA亚基和几个蛋白组份构成。RNA亚基(human telomerase RNA, hTR)含有端粒DNA复制的模板。蛋白组分包括具有催化活性的端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)和端粒酶相关蛋白1( human telomerase-associatedprotein 1, hTEPl)。hTR和hTEPl在很多正常人组织中都有表达,而hTERT则表达于细胞永生化过程中具有端粒酶活性的细胞中,在细胞的癌变过程中起关键作用。近来,越来越多研究表明,端粒酶催化亚单位hTERTmRNA可能是端粒酶激活的关键限速步骤。RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)能特异性抑制相应基因序列的mRNA表达。本研究试图研究小发夹RNA (small hairpin RNA, shRNA )载体介导抑制人卵巢癌细胞中端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase , HTERT)基因的表达、对卵巢癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。采用RT-PCR法在卵巢癌细胞株A2780、SKOV3、HO8910中筛选表达HTERT的细胞,结果提示三种细胞均表达hTERTmRNA,其中以A2780细胞表达最强;将hTERT cDNA的两段19bp的DNA序列及其反向重复序列分别用9bp的连接序列连接后再接5个T碱基,将此两段DNA序列克隆至pSilencer4.1-CMV载体中CMV启动子的下游,形成能在体内合成hTERT特异性的短发夹状RNA的重组质粒载体pSilencer4.1-CMV-T1、pSilencer4.1-CMV-T2。采用脂质体介导的DNA转染方法将重组质粒与对照质粒pSilencer4.1-CMV分别转染A2780细胞。转染48小时后用RT-PCR