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目的: (1)观察Toll样受体4(Toll-like receptor4，TLR4)及维生素D受体(VitaminD Receptor, VDR)在小鼠肥大细胞P815的表达情况。 (2)观察屋尘螨抗原(Dermatophagoides pteronyssinus，Der p)对P815细胞TLR4、VDR的表达及白细胞介素-4(Interleukin-4，IL-4)、白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）分泌的影响，探讨Der p是否可以通过TLR4对肥大细胞产生作用。 (3)观察1，25(OH)2D3对Der p直接作用的P815细胞TLR4、VDR的表达及IL-4、IL-10分泌的影响，探讨1，25(OH)2D3在肥大细胞免疫调节中的作用。 方法: (1)逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)法及免疫荧光(Immunofluorescence，IF)法检测P815细胞TLR4及VDR的表达情况; (2)将P815细胞接种至6孔平底细胞培养板培养24h，分别给予不同浓度Derp(0，0.0001，0.001，0.01，0.1μg/ml)培养不同时间(2h，6h，12h，24h，36h)，实时荧光定量PCR(Real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR)法检测各组细胞TLR4 mRNA及VDR mRNA的表达变化，并确定Der p的最适作用浓度及作用时间;免疫印迹(Western Blotting，WB)法检测0.1μg/ml Der p作用于肥大细胞36h后TLR4及VDR的蛋白表达变化。 (3)将P815细胞接种至6孔平底细胞培养板培养24h，分为4组:空白对照组（Ⅰ组），1，25(OH)2D310-12M组（Ⅱ组），1，25(OH)2D310-10M组（Ⅲ组），1，25(OH)2D310-8M组（Ⅳ组），培养36h后，Real-time PCR法检测各组细胞TLR4mRNA及VDR mRNA的表达变化，WB法检测TLR4及VDR的蛋白表达变化，酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法检测各组细胞悬液上清中IL-4、IL-10的表达情况。 (4)将P815细胞接种至6孔平底细胞培养板培养24h，分为5组:空白对照组（a组），Derp0.1μg/ml组（b组），Der p0.1μg/ml+1，25(OH)2D310-12M组(c组), Der p0.1μg/ml+1,25(OH)2D310-10M组（d组）,Der p0.1μg/ml+1,25(OH)2D310-8M组（e组），培养36h后，Real-time PCR法检测各组细胞TLR4 mRNA及VDR mRNA的表达变化，WB法检测TLR4及VDR的蛋白表达变化，ELISA法检测各组细胞悬液上清中IL-4、IL-10的表达情况。 结果: (1) P815细胞上TLR4及VDR的表达情况:RT PCR及IF均显示TLR4、VDR在P815细胞上有表达。 (2)不同浓度Der p处理P815细胞不同时间后TLR4 mRNA及VDR mRNA表达结果:Der p浓度为0.0001μg/ml时，作用不同时间点P815细胞TLR4 mRNA表达均无明显变化(P＞0.05)，而0.001μg/ml，0.01μg/ml，0.1μg/ml的Der p均可上调P815细胞TLR4 mRNA的表达，但没有明显时间依赖性。在作用36h组，C、D、E组TLR4 mRNA表达显著高于A组（P＜0.05或P＜0.01），且呈浓度依赖性上调。Der p浓度为0.0001μg/ml时，作用2，6，12，24h后P815细胞VDR mRNA的表达均无明显变化(P＞0.05)，但作用36h后VDR mRNA表达明显下降(P＜0.05); Der p浓度在0.001μg/ml时，作用2，6h后VDR mRNA的表达无明显变化(P＞0.05)，但在作用12，24，36h后，P815细胞VDR mRNA表达明显下降（P＜0.05或P＜0.01）;在0.01μg/ml，0.1μg/ml浓度下作用各时间点VDR mRNA表达均显著下降（P＜0.05或P＜0.01），但相同浓度条件下VDR mRNA表达减少无明显时间依赖性。在12h和24h作用组，VDR mRNA表达呈浓度依赖性下降。 (3)不同浓度Der p处理P815细胞36h后TLR4和VDR蛋白表达结果:B、C、D、E组TLR4蛋白表达均显著高于A组(P＜0.05或P＜0.01)，且TLR4蛋白表达呈浓度依赖性上调;B组VDR蛋白表达与A组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，C、D、E组VDR蛋白表达均显著低于A组(P＜0.05或P＜0.01)，且呈浓度依赖性下降。 (4)不同浓度1，25(OH)2D3处理P815细胞36h后TLR4和VDR mRNA和蛋白表达结果:Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组TLR4 mRNA及蛋白表达与Ⅰ组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);Ⅱ、Ⅲ组VDR mRNA表达与Ⅰ组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，Ⅳ组VDR mRNA表达显著高于Ⅰ组(P＜0.05)，Ⅱ组VDR蛋白表达与Ⅰ组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，Ⅲ、Ⅳ组VDR蛋白表达显著高于Ⅰ组(P＜0.05或P＜0.01)。 (5) Der p、1，25(OH)2D3联合处理P815细胞36h后TLR4和VDR mRNA和蛋白表达的变化:与a组比较，b组TLR4 mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.01及P＜0.05)，VDR mRNA及蛋白表达明显下降（P＜0.01及P＜0.05）;与b组比较，c、d组TLR4 mRNA表达无明显变化(P＞0.05)，e组TLR4 mRNA表达明显升高(P＜0.01)，c、d、e组VDR mRNA表达明显升高(P＜0.05)，c组TLR4和VDR蛋白表达均无明显变化(P＞0.05)，d、e组TLR4蛋白表达显著升高(P＜0.05)，VDR蛋白表达显著升高(P＜0.01)。 (6)不同浓度1，25(OH)2D3处理P815细胞36h后上清中IL-4、IL-10浓度的变化:Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组上清中IL-4浓度与Ⅰ组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，Ⅱ组上清中IL-10浓度与Ⅰ组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，Ⅲ、Ⅳ组上清中IL-10浓度与Ⅰ组比较显著升高(P＜0.01)。 (7) Der p、1，25(OH)2D3联合处理P815细胞36h后上清中IL-4、IL-10浓度的变化:与a组比较，b组上清中IL-4浓度显著升高(P＜0.01)，IL-10浓度无明显变化(P＞0.05);与b组比较，c、d、e组上清中IL-4浓度显著下降(P＜0.05或P＜0.01)，且1，25(OH)2D3浓度越高，IL-4下降越明显，而IL-10浓度无明显变化(P＞0.05)。 结论: (1)尘螨抗原可通过上调肥大细胞上TLR4表达，下调VDR表达，使IL-4分泌增加，从而促进炎症及过敏反应的发生。 (2)1，25(OH)2D3可通过上调肥大细胞上VDR表达，使IL-10分泌增加，从而发挥抗炎作用。 (3)1，25(OH)2D3对尘螨抗原引起的肥大细胞免疫反应的干预作用可能是通过上调肥大细胞上VDR的表达，抑制IL-4的合成和分泌，从而抑制Th2型免疫应答。