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由松材线虫引起的松萎蔫病严重威胁我国的森林资源、生态环境和自然景观,造成了巨大的经济和生态损失,被列为我国的森林病虫害之首,该病的防控已成为我国林业迫切需要解决的重大课题之一。植物根部的微生物群落通常与病害的发生相互影响,已有研究表明松萎蔫病的发生与松树根部的外生菌根真菌(Ectomycorrhizal fungi, ECMF)具有相关性。为了系统地揭示松萎蔫病与松树根部真菌的关系,本论文研究了陕西省商洛市柞水县松萎蔫病发生区和未发生区油松根部的根尖活性、ECMF和深色有隔内生真菌(Dark septate endophytes, DSE)的侵染情况;通过油松根部可培养真菌的分离和鉴定,分析了两个样区油松根部真菌的群落结构和多样性;将分离得到的ECMF和DSE菌种回接油松幼苗,检测这些菌株对油松生长的影响,筛选出有促生作用的优势分离菌种,并研究其生长特性,优化其培养条件。本文首次研究了DSE与松萎蔫病的关系,有关分离真菌对油松萎蔫病抗性的影响尚有待进一步研究。1.松萎蔫病发生区和未发生区油松根部真菌的侵染特征研究结果显示,松萎蔫病未发生区油松根部的活性根尖比、菌根根尖比和ECMF的侵染率均显著高于发生区(p<0.05),而DSE的侵染率(p<0.05)和微菌核密度低于松萎蔫病发生区;在两个样区油松根部ECMF的侵染率都显著高于(p<0.05)DSE。表明松萎蔫病的发生影响了油松根部的活性、菌根的形成、以及ECMF和DSE的侵染。2.松萎蔫病发生区和未发生区油松根部可培养真菌的群落结构和多样性从两个样区油松根部共分离到131种真菌,根据形态和分子学特征最终鉴定为23种,其中DSE占绝对优势,Phialocephala fortinii和Cryptosporiopsis ericae为油松根部分离真菌中的优势种;两个样区油松根部真菌的群落组成存在明显差异,松萎蔫病未发生区真菌群落的丰富度(17)和多样性(2.012),以及ECMF的相对丰度(8%)都高于松萎蔫病发生区(分别为11、1.198和1.6%),而DSE的相对丰度(70%)却明显低于发生区(82.7%),有5种真菌在两个样区同时分布。以上结果表明,松萎蔫病的发生影响了油松根部真菌的群落组成和多样性。3.分离真菌回接油松幼苗分离得到的8种DSE(Phialophora mustea、Exophiala salmonis、Paraphomachrysanthemicola、P. fortinii、Cadophora finlandia、C. ericae、Oidiodendron maius、Trichocladium opacum)和2种ECMF(Lycoperdon perlatum和Ceriporia lacerata)均成功回接油松幼苗,侵染率在34.0%~96.0%之间,并在油松根部分别形成了DSE和ECMF的特征,其中有4种DSE(P. mustea、E. salmonis、P. chrysanthemicola、P. fortinii)还在油松根部形成了类似外生菌根的典型结构-菌套。这些菌种能从油松根系中再次被分离和纯化,表明它们确实为油松的ECMF和DSE。4.分离真菌对油松幼苗生长的影响油松幼苗接种以上菌种后,株高、地径、地上干重和地下干重均高于不接菌的对照。接种E. salmonis和P. fortinii的松苗地径显著(p<0.05)高于不接菌对照;接种P. mustea、E. salmonis、P. chrysanthemicola、P. fortinii和C. finlandia的松苗地下干重显著高于对照(p<0.05),其中,接种P. fortinii后松苗的地下干重比不接菌对照高175%,显著提高了松苗的生长和生物量。综上所述,P. fortinii对油松幼苗的促生效果最佳。5. P. fortinii培养条件的优化及生长特性研究对分离的优势菌种,并对油松幼苗有明显的促生效果的P. fortinii,进行培养条件的优化及生长特性研究。结果表明:在不同温度(20、25、30、35°C)、pH(3、4、5、6、7)、转速(80、100、120、140rpm)的培养条件下,P. fortinii在温度20°C、转速140rpm、pH3时生长最好。在不同碳源(葡糖糖、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉和甘露醇)和氮源(硝酸铵、磷酸氢二铵、硝酸钾、蛋白胨和麦芽浸粉)条件下,在固体培养时,其最佳碳源和氮源分别为乳糖和麦芽浸粉;在液体培养时,其最佳碳源和氮源分别为可溶性淀粉和蛋白胨。P. fortinii的生长及菌落特征不易受碳源的影响,而菌落颜色、质地和大小受氮源影响较大。