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目的肺癌现在已成为世界范围内最为常见的一种恶性肿瘤,其发病率和病死率也是最高的一种肿瘤,而且随着地球环境被污染及人们生活方式的改变,近年来呈现逐渐上升的趋势。在中国,肺癌也是严重威胁我国人民身心健康的一种恶性肿瘤,在城市及农村,肺癌均成为发病率及死亡率排名前列的肿瘤类型。绝大多数肺癌患者起病比较隐匿,初次被诊断时已发生局部侵袭及远处转移,肺癌确诊时已经失去治愈机会。传统的肺癌治疗主要包括手术治疗、放射治疗及化学治疗方式。其中手术治疗是肺癌患者的主要根治方法,但对于中晚期已经发生扩散和转移的肺癌患者,其已丧失最好的治疗时机。虽然伴随着肿瘤发病机制研究的深入,肺癌患者的治疗有了很大的提高,但是存活率并未得到明显改善,这使得肺癌的治疗仍然面临较大挑战。因此,深入了解肺癌尤其是中晚期肺癌患者肺癌细胞生长、侵袭转移的分子机制,对于肺癌的早期诊断治疗及中晚期患者的预后有着重要意义。近年来的研究显示,非编码RNA在人体及其它生物体内发挥着重要的功能。长链非编码RNA是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA。最近,长链非编码RNA被发现在多个方面行使生物学功能,包括调控基因表达,m RNA选择性剪切,改变细胞内蛋白定位,介导染色质重构等。长链非编码RNA在肿瘤中的功能也成为肿瘤领域的研究热点,受到越来越多研究者的注意。大量长链非编码RNA在多种肿瘤中被广泛研究,这些长链非编码RNA在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。miRNA是近十几年来被发现的一种短链非编码RNA,其长度约22个核苷酸,miRNA在进化上具有高度保守性,在生物发展进化进程中起着举足轻重的作用。miRNA可调节生物的生长发育,调控基因的表达,改变细胞的周期,调节人体的新陈代谢等。许多肿瘤的发生发展都与miRNA的误调有着密切的关系,miRNA调节肿瘤细胞的生长增殖、转移、凋亡及肿瘤组织血管的形成、能量代谢等。近年来,长链非编码RNA和miRNA在肿瘤发生发展中的相互作用,被越来越多的人所重视。本课题就长链非编码RNA UCA1和miRNA138/193之间的关系进行探讨。方法1.经郑州大学第一附属医院伦理委员会的批准,20例肺癌患者手术切除的肺癌组织和癌旁正常肺部组织被收集。2.肺癌细胞系A549和H1650分别培养在含10%胎牛血清的DMEM或RPMI1640培养基中,并加入100μg/ml青霉素和100μg/ml链霉素。将细胞置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中进行培养。每2至3天传代一次细胞,并选取对数生长期细胞进行实验。3.Real time(实时定量)PCR方法检测UCA1、CDK6、p21、p27、HMGB1、Slug、MMP9、miR-193和miR-138等基因在肺癌组织或细胞系中的表达水平。4.根据转染试剂Lipofectamine 2000说明书,对肺癌细胞进行转染。5.通过细胞增殖分析实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)分析肺癌细胞的增殖能力。6.通过基因克隆技术,构建p GL3双荧光素酶报告基因及突变型基因。7.通过双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测micro RNA对UCA1的靶向性。8.通过Western blot技术检测CDK6、p21、p27、HMGB1、Slug、MMP9蛋白表达水平。9.通过细胞划痕实验分析(Wound healing assay)技术,分析肺癌细胞的迁移能力。10.通过细胞侵袭实验分析(Transwell assay)技术,分析肺癌细胞的侵袭能力。11.所有数据采用SPSS18.0统计软件(SPSS Inc,Chicago,IL,USA)进行分析。结果1.通过real time PCR分析,结果显示,与正常组织相比,UCA1在肺癌组织中的m RNA表达水平明显升高。2.UCA1表达下调导致A549及H1650肺癌细胞增殖能力下降。3.UCA1表达下调导致A549及H1650肺癌细胞迁移能力下降。4.在线的预测结果显示,miR-138和miR-193可能是潜在的UCA1的miRNAs,它们结合UCA1上的1395-1433bp区。5.miR-138/miR-193的过表达降低了UCA1的表达。6.miR-138/miR-193的抑制增强了UCA1的表达。7.通过双荧光素酶报告基因实验显示,miR-138和miR-193直接靶向长链非编码RNA UCA1。8.UCA1逆转了miR-138/193对肺癌细胞增殖能力的抑制作用。9.UCA1逆转了miR-138/193对肺癌细胞迁移能力的抑制作用。10.UCA1逆转了miR-138/193对肺癌细胞侵袭能力的抑制作用11.miR-138/193调控了UCA1下游相关基因。12.UCA1调控了miR-138/193共同靶基因CDK6。13.CDK6的m RNA和蛋白在肺癌组织中高表达。14.miR-138和miR-193 RNA在肺癌组织中的表达水平明显低于正常组织。15.miR-138/193与UCA1在肺癌组织中的表达负相关。结论miR-138/193在肺癌组织的低表达与UCA1在肺癌组织中的高表达呈负相关。UCA1表达下调导致A549及H1650肺癌细胞增殖及迁移能力下降。UCA1逆转了miR-138/193对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。