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目的:前期研究表明,沙蚕蛋白酶（NAP）具有很好的抗血栓和降纤功能,同时对白血病细胞及非小细胞肺癌细胞有明显的增殖抑制作用,因此有望开发成临床药物。本文从药物的吸收、分布和排泄三个方面对NAP进行了初步药代动力学研究。利用FITC对NAP进行荧光标记并进行表征,在此基础上研究NCI-H1299细胞对NAP的吸收特性、吸收途径及其在细胞中的分布情况;通过Calu-3细胞单层模型来模拟研究NAP在肺部的吸收特性;对大鼠进行静脉注射和肺部给药后,研究NAP的药代动力学参数、组织分布及排泄;为进一步的临床药代动力学奠定基础。方法:通过FITC与NAP在碱性溶液中发生亲核反应完成标记,然后用透析法和有机溶剂沉淀法去除游离FITC,并用薄层色谱法、红外光谱法、紫外光谱法及荧光光谱法对标记物进行表征,紫外分光光度法计算标记度;通过测定NAP与FITC-NAP的酶促反应动力学参数来比较NAP在标记前后的活性,同时应用MTT法考察NAP标记前后对NCI-H1299细胞毒性的影响。采用流式细胞仪研究NCI-H1299细胞对FITC-NAP的摄取机制。荧光显微镜定性观察NCI-H1299细胞对FITC-NAP的摄取。利用Calu-3细胞建立肺部模型来模拟研究药物在肺部的吸收,并通过测定跨膜电阻值、标志酸性蛋白表达和倒置显微镜和透射电镜观察细胞单层及Calu-3细胞表面微绒毛和细胞间紧密连接以验证细胞单层模型的成功;采用MTT法确定NAP在细胞模型转运实验中的最高浓度,然后通过Elisa法对NAP进行定量检测,从而研究转运时间和NAP浓度对NAP在Calu-3细胞单层模型转运的影响,并计算累积转运量和表观渗透系数。大鼠采用静脉注射和肺部给药两种给药方式给药后,在不同时间点通过尾静脉取血后,检测血药浓度并计算药代动力学参数,给药1h后,处死大鼠取出心、肝、脾、肺和肾,匀浆后离心取上清,通过Elisa法对NAP进行定量检测来研究NAP在大鼠体内组织中的分布情况。大鼠静脉注射给药后,在不同时间点收集大鼠的尿液,尿液离心取上清,通过Elisa法对NAP进行定量检测来研究NAP在大鼠体内排泄情况。结果:每分子标记产物中约含1.78分子FITC,其最佳荧光激发波长为490 nm、发射波长为515 nm。傅里叶变换红外光谱比较分析的结果表明,标记前后NAP的结构特征未发生明显变化,荧光标记后NAP的活性未受到显著影响。NCI-H1299细胞对FITC-NAP的摄取与药物浓度、作用时间呈正相关。氧化苯砷组的荧光强度低于FITC-NAP组且有极显著差异（P<0.01）,因此NAP的摄取机制为内吞。进一步研究发现NCI-H1299细胞摄取NAP受到网格蛋白依赖性内吞和小窝/脂筏蛋白介导的内吞共同作用。荧光显微镜观察发现随着时间的增加,更多的细胞摄入FITC-NAP,且主要分布在细胞膜及细胞质,细胞核中未见分布。Calu-3模型转运实验发现NAP的转运具有时间和浓度依赖性,顶侧（A）到底侧（B）的转运速度远大于反向转运速度,转运量也明显高于底侧（B）到顶侧（A）,说明NAP的转运具有方向性,吸收作用大于外排作用。实验测得NAP的Papp（A-B）为（5.49±0.60）×10-7 cm·s-1,说明NAP肺部给药后属于相对吸收较少的药物。大鼠静脉给药后Tmax为（10±0）min,而肺部给药后Tmax为（190±24.495）min,静脉注射给药和肺部给药的AUC0-t值分别为（10628.947±1759.428）ng/mL*min和（6574±166.536）ng/mL*min,结果表明NAP肺部给药吸收较为缓慢,吸收程度相对较差、生物利用度相对较低。但静脉注射后NAP的消除半衰期t1/2为（39.027±12.121）min,而肺部给药后的消除半衰期t1/2为（63.834±44.697）min,说明肺部给药具有较好的缓释效果,相比静脉注射而言体内滞留时间均较长,消除较缓慢。研究表明大鼠静脉注射NAP后其在肾脏中分布最高,说明NAP主要分布到肾脏并通过尿排泄的消除途径消除。结论:沙蚕蛋白酶荧光标记方法的建立为后续研究NAP的吸收代谢过程、作用机理、生物分子间相互作用等科学问题提供了有利条件。NCI-H1299细胞对FITC-NAP的摄取与药物浓度、作用时间呈正相关,其摄取机制为受到网格蛋白依赖性内吞和小窝/脂筏蛋白介导的内吞。Calu-3模型转运实验表明NAP肺部给药后属于相对吸收较少的药物。通过对静脉注射和肺部给药的药代动力学参数对比发现NAP肺部给药吸收较为缓慢,吸收量较少、生物利用度相对较低,但肺部给药具有较好的缓释效果,相比静脉注射而言在体内滞留时间均较长,且消除较缓慢。静脉注射后NAP主要分布到肾脏并通过尿排泄的途径消除。