目的:动脉粥样硬化是一种大、中型动脉从内膜到中膜的进行性、代谢损害性的炎症样疾病,主要特点是灶性脂质聚集(粥瘤)、散乱的胶原纤维聚集(纤维化)及慢性炎症反应,是冠心病、脑卒中和间歇性跛行等多种心脑血管疾病的共同病理基础或原始病因。动脉粥样硬化的主要原因是高脂血症,首先是造成血管内膜功能的损害。调节血脂,调节血管内膜的功能是预防或治疗动脉粥样硬化的重要方法。黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏和栀子组成,是中医清热解毒法的代表方剂,具有泻火解毒功效。该方临床应用广泛,包括治疗心脑血管疾病。本论文主要研究黄连解毒汤对高脂血症引发主动脉病变的预防作用及其机制,为动脉粥样硬化的预防提供参考。一、黄连解毒汤对实验性高脂血症大鼠的调血脂作用方法:高脂饲料配方为:2%胆固醇,0.8%胆酸钠,0.1%丙基硫氧嘧啶,8%白糖,5%猪油,5%蛋黄粉,79.1%大鼠基本饲料。机器加工制作成合格的大鼠颗粒饲料。60只体重为250g～300g的雄性SD大鼠分为正常组和模型组,正常组10只,模型组50只。正常组常规饲养,模型组用高脂饲料饲养,均每5只单笼饲养,连续53天。第53天时从眼眶采血,分离血清,检测血清TG、TC、LDL-C和HDL-C含量。以上模型组大鼠再随机分为模型组,黄连解毒汤高剂量组、中剂量组和低剂量组,辛伐他汀组,每组10只。按1ml/100g(指每100g体重灌胃容积为1ml,下同)的灌胃容积,正常组和模型组每天灌胃纯净水,黄连解毒汤高、中、低剂量组的剂量分别为2.4g/kg、1.2g/kg、0.6g/kg,辛伐他汀组的剂量为1mg/kg。连续给药62天。试验过程中注意观察动物反应,按期称量体重,末次给药后1h从腹主动脉采血,制备血清。检测血清TG、TC、LDL-C和HDL-C,同时测定血清MDA和SOD。结果:给高脂饲料53d后,大鼠血清TG、Tc和LDL-C升高均有极显著意义,HDL-C变化无显著意义;用黄连解毒汤进行干预62d后,模型组大鼠TC和LDL-C极显著升高,TG和LDL-C的变化不显著,大鼠的体重增加幅度显著减少,血清中SOD和MDA变化无显著意义。黄连解毒汤高、中、低剂量组大鼠TC和LDL-C显著降低,体重增加幅度显著增加,TG和HDL-C的变化无显著意义,SOD的变化无显著意义,MDA含量显著降低,高剂量组最低,并呈量效关系趋势。二、黄连解毒汤对高脂血症引发大鼠主动脉病变的预防作用方法:检测血清NO和iNOS。采血后剖取主动脉进行病理分析:用透射电镜观察主动脉弓升段的超微结构,主动脉弓降段进行苏丹Ⅳ染色,胸主动脉进行HE染色、免疫组化染色并计算平均光密度以观察平滑肌肌动蛋白表达,胸主动脉和腹主动脉内膜用流式细胞仪进行细胞周期分析和细胞凋亡分析。结果:模型组大鼠血清中NO和iNOS均显著升高,黄连解毒汤各组的NO和iNOS显著降低;HE染色结果表明,模型组大鼠主动脉紧张度增加,血管壁变薄,内皮细胞层断续,向管腔指状突起,与中膜间隙增大,内弹性膜不清晰,中膜弹力膜平直,平行排列,两层弹力膜间有一层平滑肌细胞,其细胞核扁长,细胞外基质增多,与外膜分界不清晰,外膜薄,少见小血管。免疫组化法染色结果表明,模型组平均光密度显著升高。苏丹Ⅳ染色可见内皮细胞层腔侧有一红染层。电镜观察发现,模型组大鼠主动脉内膜内皮细胞脱落至管腔,内皮细胞异形性明显,细胞膜缺损,不规则凹陷且深,细胞核异形性明显,核膜受损且不规则,常染色质多于异染色质,异染色质不匀,边集于核膜。附于内弹性膜的内皮细胞变大,细长,细胞核较大较长,异形性明显,呈分叶状,核膜凹陷明显且深,染色质不匀,异染色质不匀边集于核膜。内弹性膜增厚,厚度不匀,内弹性膜断裂,表面有凹陷,附于其表面的内皮细胞核固缩,细胞膜缺损,平滑肌细胞变小,异形性明显,细胞膜受损,异染色质多,边集,细胞间隙增大,其间有胶原原纤维。中膜的弹力膜受损,不均匀,平滑肌细胞变小,细胞膜受损,细胞间隙增大,细胞外基质增多。黄连解毒汤各组的上述变化减轻;流式细胞分析术结果表明,模型组大鼠血管内皮细胞的分裂增殖指数显著升高,细胞凋亡率显著升高,黄连解毒汤各组大鼠血管内皮细胞的分裂增殖指数和细胞凋亡率显著降低。三、黄连解毒汤对实验性高脂血症大鼠的其它相关作用方法:检测血清GLU.、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量以及ALT和AST的活力。取肝脏左上叶的左下沿部分进行苏丹Ⅳ染色。结果:黄连解毒汤各组大鼠血清GLU比模型组显著降低;模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6比正常组显著升高,黄连解毒汤组TNF-α和IL-6显著降低,IL-1β变化不显著;模型组大鼠ALT活力显著升高,AST活力变化不显著,黄连解毒汤组ALT活力无显著变化,AST活力显著升高。苏丹Ⅳ染色结果表明,模型组大鼠肝脏的脂肪性变严重,黄连解毒汤对大鼠肝脏脂肪性变的影响不明显。四、黄连解毒汤含药血清对血管内皮细胞的影响方法:20只体重235g～255g的雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常组,黄连解毒汤高、中、低剂量组。按1ml/100g每天2次分别给大鼠灌胃纯净水和2.4g/kg、1.2g/kg、0.6g/kg剂量的黄连解毒汤水提取物,连续5d,末次给药后1h麻醉,腹主动脉采血,4℃3000rpm离心10min,分离血清,同组各大鼠的血清合并,56℃灭活30min,-20℃保存待用。培养的HUVEC细胞设立正常组、损伤组、空白组、黄连解毒汤高、中、低剂量组,正常组用5%FBS RPMI-1640培养,其余各组先用100μg/ml的Ox-LDL培养,12h后换培养液,给药组分别加入5%的大鼠空白血清、黄连解毒汤高、中、低剂量组血清继续培养12h,观察细胞形态,MTT法测定细胞活力。结果:体外试验结果表明,Ox-LDL损伤组HUVEC细胞活性显著降低,黄连解毒汤含药血清组HUVEC细胞活性与损伤组比较无显著差别,未见黄连解毒汤含药血清对Ox-LDL引起血管内皮细胞活性降低的保护作用。FBS可促进HUVEC增殖,黄连解毒汤含药血清对FBS的促增殖作用有抑制作用。结论整体试验表明,大鼠喂饲高脂饲料形成实验性高脂血症,同时并发炎症和肝脂肪性变。高脂血症可引发主动脉病变,表现为血管紧张,血管壁变薄,内膜脂质沉积,内皮细胞损伤、脱落、增生,内弹性膜断裂,内弹膜紧张,平滑肌细胞肌动蛋白表达增加,细胞外基质增多,外膜变薄。黄连解毒汤能调血脂,改善高脂血症,对高脂血症引发主动脉病变尤其是血管内皮细胞病变有预防作用。黄连解毒汤还有抗炎作用,但对肝脂肪性变改善不明显。体外试验表明,Ox-LDL引起血管内皮细胞活性降低,FBS可促进HUVEC增殖,黄连解毒汤含药血清对Ox-LDL引起血管内皮细胞活性降低未见明显保护作用,对FBS的促增殖有抑制作用。总之,黄连解毒汤对实验性高脂血症大鼠具有调血脂作用,可预防高脂血症引发的血管内皮细胞病变,减轻主动脉病变,可能对动脉粥样硬化的预防有实用价值。