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弓形虫疫苗的研究经历了从虫体灭活疫苗、减毒活疫苗和基因工程疫苗的巨大飞跃。虫体灭活疫苗安全性较高,但保护性较弱,基本没有实用价值；减毒活疫苗具有较好的免疫力,但其存在很大的安全隐患；基因工程疫苗可安全有效刺激机体产生特异性的免疫应答,但受限于载体容量无法提供全面的有效保护。目前表位疫苗被认为是第四代疫苗,是新近发展起来的的疫苗研制趋势。表位疫苗设计灵活、特异性强,直接进行人工合成的表位疫苗能够被具有遗传多样性的MHC分子所识别进而提高抗原递呈效率,诱导宿主产生高效的体液免疫和细胞反应。本课题评估了弓形虫GRA10蛋白的优势表位作为弓形虫表位疫苗的潜力。GRA10(致密颗粒蛋白10)是一种由364个氨基酸序列构成的新型致密颗粒蛋白,参与并调节宿主细胞rRNA的合成,对虫体在胞内的生长与增殖扮演着重要的角色。我们通过生物信息学和免疫学方法预测筛选出了弓形虫GRA10蛋白中的B细胞表位、CD4+T细胞表位和CD8+T细胞表位,组成弓形虫GRA10复合表位并对其免疫原性进行检测。壳聚糖由于其生物相容性好、生物可降解易于合成和修饰加工等优势成为了疫苗载体和佐剂研究中的热点。因此我们将复合表位用壳聚糖微球进行装载,构建弓形虫GRA10复合表位壳聚糖微球疫苗。通过体外诱导树突状细胞,观察微球疫苗刺激树突状细胞抗原提成能力的改变,从而对该疫苗的免疫机制进行初步探讨。通过免疫接种小鼠,检测小鼠免疫后体液免疫和细胞免疫各项指标的水平,评估该疫苗对弓形虫慢性感染的保护性。结果显示,弓形虫GRA10复合表位具有更好的免疫原性,可发挥B细胞表位、CD4+T细胞表位和CD8+T细胞表位的联合作用。进一步机制研究发现,弓形虫GRA1 0复合表位壳聚糖微球疫苗可以有效诱导树突状细胞高表达表面协同刺激分子CD86和分泌更多的细胞因子,进而有效刺激淋巴细胞参与免疫应答。在小鼠免疫接种实验表明,弓形虫GRA10复合表位壳聚糖微球疫苗不仅可以诱导小鼠产生高水平的抗体IgG及IgG2a,而且可以有效的提高脾细胞的增殖水平,诱导产生促进CD8+T细胞亚群增殖为主并产生大量Thl型细胞因子IL-2,IFN-γ的细胞免疫反应,说明疫苗能够诱导小鼠产生很强的体液免疫和细胞免疫水平。而且弓形虫GRA10复合表位壳聚糖微球疫苗可以有效降低小鼠脑内包囊的生成,对抵抗弓形虫慢性感染有明显的作用。本研究证实弓形虫GRA10复合表位壳聚糖微球疫苗可以有效保护小鼠抵抗弓形虫慢性感染,是一种有潜力的候选疫苗,为弓形虫疫苗研制奠定了基础。