论文部分内容阅读
芋螺毒素是海洋软体动物芋螺分泌的一类具有神经药理活性的海洋生物多肽。芋螺毒素多数由12~46个氨基酸残基所组成,富含二硫键,能特异性地作用于体内各种离子通道和细胞膜上神经递质的受体。芋螺毒素可作为体内一些具有重要生理功能靶点的探针,亦可作为新药的先导化合物或直接开发成新药。目前比较多的研究集中在有关芋螺毒素的进化机制方面,而生活在相同环境下的不同芋螺毒素转录本的差异及进化特征尚不清楚。
本研究旨在构建中国南海特有芋螺的cDNA文库,并对芋螺毒素的基因进化和表达谱进行分析,从中发现具有一些新的结构特点的毒素基因及相关酶类,同时建立稀有芋螺毒素资源库,为后续功能研究和相关应用奠定基础。主要研究结果如下:
1.利用Gateway 技术构建了中国南海的玉女芋螺、黑星芋螺、堂皇芋螺、大理石芋螺四种芋螺cDNA文库。四种文库共分析了1312个转录本,约50%为毒素序列,其中36种229个克隆为新毒素序列。
2.四种文库均含有A-,T-,O-三种超家族,同时还存在M-,I-,D-,J-,P-,L-以及非富含半胱氨酸的毒素比如contryphan和 conantoxin,其中T 超家族毒素占主要组分。进化及选择压力分析表明分布于中国南海相同区域的芋螺存在趋同进化现象。
3.利用RACE 方法成功地从中国南海玉女芋螺(Conus virgo)、黑星芋螺(Conuseburneus)、堂皇芋螺(Conus imperialis)、桶形芋螺(Conus betulinus)cDNA中克隆出包含有完整3’和5’非翻译区的PDI 全基因序列,序列分析结果表明各芋螺之间的同源性大于90%,而与对虾、人类、酵母同源性均小于60%,各芋螺PDI与其它生物的两个活性位点序列高度保守,而底物结合位点具有物种特异性,通过生物信息学方法分析各芋螺基因序列,所得进化树显示各芋螺PDI的特征可能受其捕食食性影响。