基于NO及iNOS的变化探讨三七总皂苷对非酒精性脂肪肝的防治作用

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【目的】复制非酒精脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠模型。探析非酒精性脂肪肝模型大鼠体内NO的变化特点,以及NO与SOD、ATP变化之间的关联。同时采用三七总皂苷治疗NAFLD大鼠,探讨其对NAFLD大鼠模型的防治作用。【方法】1.动物分组:将40只雄性清洁级SD大鼠称重,按照体重大小编号,根据随机数字表将大鼠随机分为4组,每组10只。即正常组10只、模型组10只、辛伐他汀组10只、三七总皂苷组10只。2.模型制备:正常组以普通饲料喂养,其余三组以高脂饲料喂养(配方:88%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇)。喂养从第1周开始持续到第12周末结束。3.分组给药:正常组和模型组均以0.9%生理盐水进行灌胃,辛伐他汀组和三七总皂苷组分别予以辛伐他汀和三七总皂苷灌胃。灌胃时间从第1周开始至第12周末结束。4.指标检测:各组大鼠每周称重一次;12周末处死大鼠后,分别检测:4.1各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肝组织总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量;4.2制作肝组织石蜡切片并进行HE染色;4.3测定血液中NO和肝组织中iNOS含量,采用荧光素-荧光素酶法检测;4.4检测肝组织中iNOS蛋白阳性表达,采用免疫组化法;4.5测定肝组织中SOD含量变化,采用黄嘌呤氧化酶法;4.6测定肝组织ATP含量测变化,采用酶联免疫吸附法测。【结果】1.正常组大鼠毛色光亮,相对活泼。模型组大鼠体重明显增加,与正常组比,差异有统计学意义(p<0.05)。2.肝组织HE染色:正常组肝细胞大小均匀,细胞核清晰呈圆形,肝索呈规律的放射状排列;模型组可见肝细胞内有大量的脂肪空泡,胞浆疏松呈网状,部分胞浆几乎完全透明,肝索排列紊乱;辛伐他汀组肝细胞中亦出现一定量的圆形脂滴空泡,但面积小于模型组;三七总皂苷组肝细胞胞浆中出现一定量大小不一的圆形脂滴空泡,但面积小于辛伐他汀组,部分胞浆疏松呈半透明网状,胞浆见疏松化。3.血清生化:与正常组比,模型组血清ALT、AST均升高,差异有统计学意义(P<0.05),并且肝组织TC、TG均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比,三七总皂苷组血清ALT、AST均降低,差异有统计学意义(P<0.05),并且肝组织TC、TG均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。4.大鼠肝组织中SOD活性含量:与正常组相比,模型组肝组织SOD活性含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比,三七总皂苷组肝组织SOD活性含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。5.大鼠肝组织中ATP含量:与正常组相比较,模型组肝组织中ATP含量在显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,三七总皂苷肝组织中ATP含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。6.大鼠血液中NO和肝组织中iNOS含量:与正常组比,模型组血液NO及肝组织iNOS相对表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比,三七总皂苷组血液no及肝组织inos1相对表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.采用配方为88%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇的高脂饲料可成功复制非酒精性脂肪肝大鼠模型。2.非酒精性脂肪肝模型大鼠血清中NO及肝组织中iNOS含量升高,表明NO及iNOS在非酒精性脂肪肝中发生发展中其含量会升高。3.非酒精脂肪肝模型大鼠血清中NO及肝组织中iNOS的含量变化与SOD及ATP含量变化具有一致性,表明NO可能参与到非酒精脂肪肝的脂质过氧化及氧化应激过程中。4.三七总皂苷可降低高脂饲料诱导的非酒精性脂肪肝模型大鼠脂肪体内NO及iNOS的含量,同时改善其脂肪变程度,对非酒精性脂肪肝起到防治作用。
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