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RNA干扰(RNAi)是近年来发现的在生物体内普遍存在的一种生物学现象。在RNAi药物开发中,一方面,需要不断发现新的靶点(siRNA或miRNA)并揭示其功能和作用机制,从而指导临床开发切实有效的RNA药物,用于重大疾病诊断和治疗,为患者带来福音。另一方面,由于小核酸类药物分子本身穿透细胞膜的能力极差,也不具备靶向功能,而且在生理环境中极不稳定,因此小核酸类药物研究的另一个重要关键是开发高效无毒的输送体系。本课题针对以上两方面开展了研究,具体工作包括以下三个方面:1、研究了miRNA190在乳腺癌转移中的作用。通过qRT-PCR分析发现miR-190的表达量与乳腺癌细胞的转移能力呈负相关关系,利用WB以及双荧光素酶报告基因分析发现miR-190的下游靶点是TCF4以及ROCK1基因,可以通过与其3’-UTR结合从而抑制靶基因转录后的表达。接着在细胞水平证实上调miR-190或下调TCF4或ROCK1可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。此外在乳腺癌转移动物模型中,发现高表达miR-190可以大大减少肺转移的发生概率,并抑制乳腺癌的肺转移。2、成功制备了聚乙烯亚胺(PEI)包被的金纳米颗粒用于siRNA输送。PEI同时作为还原剂和稳定剂,通过静电作用以合适的质量比结合siRNA,使得纳米颗粒分散良好,有均一的大小和结构。在结合siRNA后,用激光共聚焦和流式细胞术检测发现PEI修饰的金纳米颗粒可以将siRNA带入细胞,实现沉默MDA-MB-435s(?)田胞中绿色荧光蛋白的表达。我们接着用PEI修饰的金纳米颗粒携载PLK1-siRNA作用于内源性细胞周期激酶PLK1,显著抑制了基因表达并诱导更多的细胞凋亡。细胞毒性MTT实验发现PEI修饰的金纳米颗粒没有表现出明显的细胞毒性。3、以异辛酸亚锡为催化剂,聚己内酯作为大分子引发剂,通过开环聚合,成功制备了一系列两亲性羟基官能化聚磷酸酯与聚己内酯的嵌段聚合物(PCL-b-PHEP)。利用核磁共振,凝胶渗透色谱、红外色谱等对嵌段共聚物的结构进行了表征。这种两亲性嵌段聚合物在水溶液可以自组装成纳米颗粒,随着疏水链段的增加,临界聚集浓度(CAC)降低并且形成尺寸较大的颗粒,并且通过调节亲疏水链段比例可以制备出不同形貌的胶束或者囊泡。MTT实验证实这类聚合物都具有良好的生物相容性,具有作为纳米药物载体的潜力。