急性髓细胞白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)是一种常见的,多发于成年人的血液系统恶性肿瘤,在我国有较高的发病率和致死率且预后效果较差。目前,AML治疗以药物化疗为主,最为经典的治疗方案为阿糖胞苷和柔红霉素两种药物的联合化疗,虽然该方案在一定程度上可以控制AML,有效延长患者的生存期,但由于药物的作用易使肿瘤细胞产生多药耐受性(Multidrug Resistance,MD),而且药物作用还会影响全身其他正常组织器官,在AML复发后可能会产生治疗相关性白血病(Therapy Related Leukemia,TRL)。因此,寻找有效的治疗靶点,开发靶向药物将成为对抗AML最有效的方法。近年来,表观遗传修饰作为研究肿瘤的发生、发展和治疗的一个热门话题,现已有多种治疗肿瘤的表观遗传分子靶向药物应用于临床,但是对于AML尚缺乏有效的研究结果。因此,表观遗传调控在AML的研究中仍有很大空间。MOF(Males Absent on the First)又称 KAT8 或 MYST1,是组蛋白乙酰转移酶MYST家族成员之一,可以特异性乙酰化组蛋白H4的第16位赖氨酸(H4K16),MOF也可以使非组蛋白发生乙酰化,如:p53、Nrf2等。在胚胎发育、细胞分化、肿瘤发生、DNA损伤等生命活动中MOF都发挥着重要的作用。研究目的:通过分析比较AML患者和正常捐赠者的骨髓样本,确定MOF在AML患者骨髓中的表达情况;以U937和THP1两种AML细胞系为研究对象,使用阿糖胞苷刺激,确定MOF的表达变化趋势和实验最适时间和剂量;在细胞中通过瞬时转染改变MOF的表达水平,使用阿糖胞苷刺激后观察细胞的存活率和凋亡率的变化情况;对比分析在U937耐药的细胞中MOF和Nrf2的表达变化情况,以及Nrf2下游分子的表达变化情况;使用组蛋白乙酰化酶抑制剂MG149与阿糖胞苷同时处理细胞,观察细胞存活率的变化。研究方法:1.通过RT-PCR检测AML临床样本中MOF的RNA水平。2.分别设置不同浓度梯度,使用阿糖胞苷处理U937和THP1两种AML细胞,通过CCK-8检测细胞在不同浓度下的存活率,并计算半数致死剂量(IC50),在IC50浓度附近设置浓度梯度,通过Western blot检测MOF在阿糖胞苷处理后的变化情况。3.构建敲低和过表达MOF的质粒,瞬时转染细胞,检测低表达MOF后,细胞凋亡和周期相关的蛋白变化;分别在细胞中敲低和过表达MOF,使用阿糖胞苷处理后,通过流式细胞术检测细胞的凋亡率,CCK-8检测细胞的存活率并计算IC50值。4.通过不断加大阿糖胞苷的浓度筛选U937的耐药细胞,检测MOF的蛋白和RNA变化,并检测Nrf2及部分下游分子的RNA变化情况。5.使用MG149和阿糖胞苷联合处理U937和THP1,检测MOF的蛋白变化、细胞凋亡水平、存活率的变化;在U937耐药细胞中使用MG149和阿糖胞苷处理,检测细胞存活率。实验结果:1.对比分析临床样本,在AML患者的骨髓样本中MOF的RNA水平远高于正常捐献者水平。2.使用阿糖胞苷刺激后,在U937和THP1细胞株中MOF的表达随着浓度的升高而逐渐降低。3.在U937细胞中,MOF低表达后,使用阿糖胞苷处理,会增加细胞凋亡水平,降低细胞存活率;过表达MOF后,使用阿糖胞苷处理,会降低细胞凋亡水平,细胞存活率有所恢复。4.在U937R细胞中,MOF的表达水平高于非耐药细胞,细胞耐药能力越强,MOF表达水平越高,在U937和U937R细胞中,瞬时转染敲低MOF后Nrf2的RNA水平与MOF的RNA水平变化一致,Nrf2及其下游分子的RNA表达情况也随细胞耐药程度的增加而升高。5.MG149可以有效抑制MOF的乙酰化水平,联合阿糖胞苷处理细胞,使细胞凋亡水平升高,存活率下降;在U937R细胞中,MG149会降低阿糖胞苷在细胞中的IC50值。结论:MOF在AML中存在重要作用,MOF对AML细胞起到一定的保护作用。在使用药物处理细胞时,低表达MOF会促进细胞的损伤,高表达MOF会使药物造成的损伤有所恢复。在耐药细胞中MOF的表达水平高于非耐药细胞,MG149处理细胞会降低其耐药能力。