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对羟基扁桃酸合酶是一种重要的双加氧酶，能催化苯丙酮酸反应生成扁桃酸。由于其独特的功能，可以将底物脱去一个碳原子，决定了其在微生物代谢途径和有机合成中具有重要应用价值，因此，成为近年来酶工程中研究的热点。本实验基于产苯丙氨酸重组菌E. coli W3110/pR15ABK的芳香族氨基酸合成途径，通过引入外源对羟基扁桃酸合酶基因，对其代谢途径延伸改造，构建扁桃酸合成途径。主要研究内容为:(1)克隆来源于东方拟无枝酸(Amycolatopsis orientalis)和天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)的对羟基扁桃酸合酶基因并构建重组菌，经酶活检测和SDS-PAGE鉴定，实现了在大肠杆菌中表达。(2)将来源不同的重组对羟基扁桃酸合酶的粗酶液，经离子交换层析(HiPrep16/10DEAE FF)和凝胶色谱(Sephadex G-75)分离纯化，分别得到重组蛋白HmaSAO、HmaSSC1和HmaSSC2三种纯酶液。经测定纯酶的比酶活、纯化倍数、回收率，结果如下：①HmaSAO的比活力为153.91U/mg，纯化倍数为12.79倍，回收率为32.43%；②HmaSSC1的比活力为505.31U/mg，纯化倍数为22.61倍，回收率为27.09%；③HmaSSC2的比活力为557.25U/mg，纯化倍数为20.91倍，回收率为26.48%。(3)根据重组对羟基扁桃酸合酶的酶学特性分析，HmaSAO的最适反应温度为28oC，在45oC酶活还可达到50%以上，pH8.0左右酶活最高，适合在偏碱性的条件下发挥功能；HmaSSC1的最适反应温度为30oC，在60oC左右其残余酶活可达到50%以上，有一定的耐热性，pH7.5左右酶活最高，适合在弱碱性的条件下发挥功能；HmaSSC2的最适反应温度为35oC，在65oC仍能达到50%以上，更具有良好耐热性，在pH7.0左右酶活最高，更易在偏中性的条件下发挥功能；HmaSSC2更适用于代谢工程改造大肠杆菌发酵生产扁桃酸。(4)将基因hmaSSC2连接到的质粒pR15ABK上，成功构建获得重组菌E. coliW3110/pR15ABKHmaS2。摇瓶发酵试验结果：10~48h为菌体的对数生长期，在48h进入稳定期，OD600为7.78；发酵60h时，产扁桃酸41mg/L。15L罐发酵试验结果：12~43h为菌体对数生长期，在43h进入稳定期，OD600为101.25；发酵52h时，产扁桃酸748mg/L。