论文部分内容阅读
慈竹广泛种植于我国西南地区,是造纸、编织以及建筑用材的良好材料。然而慈竹易受到生物和非生物胁迫的影响,进而造成慈竹大面积的减产;同时,作为多年生禾本科植物,随着栽培年限的增加,土壤板结程度逐渐增加从而导致肥力下降。因此,研究提高慈竹抗生物或非生物胁迫的能力并增强其对营养元素的吸收转运是增加慈竹产量的一种有效途径。b ZIP是转录因子家族中的重要成员,研究认为其主要参与到生物与非生物胁迫的调控。另外,大量研究认为NRT基因主要参与植物对氮元素的吸收和利用。因此,本研究以慈竹为材料,克隆得到了两个b ZIP基因和一个NRT基因。首先对三个基因进行了生物信息学分析并成功构建过表达载体转化毛白杨以及毛竹;然后对b ZIP基因进行酵母单杂交以及亚细胞定位等转录因子特性分析;最后分别对转基因毛白杨进行干旱、低氮等胁迫试验。主要研究结果如下:1.对Beb ZIP4和Beb ZIP6转录因子进行酵母单杂交,结果表明两者均有转录自激活活性,两者的β-半乳糖苷酶活性分别为201和115 Miller;2.对Beb ZIP4和Beb ZIP6转录因子进行亚细胞定位分析,结果显示两者均定位在细胞核,与亚细胞定位预测结果相一致;3.在实验室已经得到了两个b ZIP基因(Beb ZIP4和Beb ZIP6)以及一个NRT基因(Be NRT1)的基础上,进行克隆并成功构建出过表达载体p CAMBIA1303-N-Beb ZIP4、p CAMBIA 1303-N-Beb ZIP6和p CAMBIA 1303-N-Be NRT1;4.采用叶圆盘法转化毛白杨获得转基因植株,其中Beb ZIP4基因的阳性株14棵,阳性率为53.84%;其中Beb ZIP6基因的阳性株13棵,阳性率为48.15%;其中Be NRT1基因的阳性株18株,阳性率为43.90%;5.采用基因枪轰击法转化毛竹幼胚,获得转基因阳性株两株:一株为转Beb ZIP4基因的植株;一株为转Be NRT1基因的植株;6.对Beb ZIP4和Beb ZIP6转基因毛白杨植株进行干旱胁迫响应分析,结果表明,转基因植株中的SOD、CAT和POD的活性,以及Proline的含量均有下降趋势;而MDA的含量确增多了。这一系列的结果表明转Beb ZIP4和Beb ZIP6基因的植株对干旱胁迫的耐受性下降,疑为非生物胁迫的负调控因子;7.H2O2活体原位检测表明,与野生型毛白杨相比较,转Beb ZIP4和Beb ZIP6基因的植株对干旱胁迫更加敏感;转Be NRT1基因的植株对低氮胁迫不敏感。