松材线虫枯萎病疫木上的蓝变菌研究

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本文从浙江宁海及云南紫溪山采集感染松材线虫的马尾松蓝变木材和感染拟松材线虫的云南松蓝变木材,针对松枯萎病疫木上的蓝变菌进行研究,研究其分类学、致病性,在主要对前两种松树分离的同时,分离了在大兴安岭采集的偃松样品。3种样品通过用培养基分离与木块保湿分离2种方法从马尾松、云南松、偃松木材中分离纯化出679株真菌,经变色实验筛选出21株蓝变菌,通过形态及分子方法鉴定,确定此21株蓝变菌菌株属7属11种蓝变菌,包括Leptographium abietinum、Ophiostomaaenigmaticum、Leptographium aenigmaticum、Botryosphaeria obtusa、Pleosporaceaesp.1、Phomopsis sp.1、Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.2、Pleosporaceae sp.3、Botryodiplodia sp.、Sphaeropsis sp.。其中L.abietinum、O.aenigmatinum、L.aenigmaticum通过形态鉴定确定为中国新纪录种。将从3种松树中所分离得到的蓝变菌菌株进行致病性测定,测试方法采用生测法,用培养3个月的木质化的马尾松苗木浸渍在摇培30d的蓝变菌过滤菌液中,每隔12h观察一次苗木变化情况,结果表明,L.abietinum致病性最强,5d可使马尾松苗木整株枯萎,其次是D.aenigmatinum、L.aenigmatinum,其它菌株对马尾松苗木也存在不同程度的致病性,而B.obtusa、Pleosporaceae sp.2、Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.3几乎无致病性,在30d内马尾松苗木与对照相比几乎无变化。针对致病性最强的菌株L.abietinum研究其生物学特性及致病机理。生物学特性结果表明,在PDA培养基上,菌丝生长最适条件,温度为25℃,黑暗,pH为5.9,最适碳源为蔗糖,最适氮源为硝酸钾;最适产孢条件,温度为25℃,黑暗,pH为7.0,最适碳源为蔗糖,最适氮源为尿素。在生物学特性研究结果的基础上进行致病机理测定。以Czapek’s琼脂为基础培养基,将氮源硝酸钾替换为尿素,接入L.abietinum菌种,摇培30d后,过滤培养液,对过滤液进行热稳定性测定,同时用茚三酮、FeCI3、CaCI23种试剂测定过滤液中主要致病物质,结果表明过滤液具有热不稳定性,其中含有蛋白质类物质和糖蛋白,进一步确定实验证明L.abietinum可以产生毒素,其毒素中的致病物质为蛋白质和糖蛋白。
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