论文部分内容阅读
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)既是海洋中的正常菌群之一,也是其优势菌群之一,还是人类和海洋动物的重要病原菌。鞭毛、胞外多糖和生物膜与病原菌的粘附力、侵染力和致病力的强弱直接相关。△tssJ是溶藻弧菌HN08155(WT)的tssJ基因缺失株。本试验室之前的研究表明,溶藻弧菌tssJ对溶藻弧菌的鞭毛、水不溶性多糖和生物膜的形成具有正调控作用;对WT和△tssJ进行转录组数据分析表明,tssJ的缺失导致96个相关基因表达下调,其中rpoN是众多表达下调基因差异最大的基因之一,所以rpoN可能是这些表型改变的主要调控基因。为此,本文利用新型自杀质粒pLP12构建溶藻弧菌的rpoN基因缺失株(△rpoN),通过分析WT、△tssJ和△rpoN的表型差异,确定溶藻弧菌rpoN基因的主要功能及其与tssJ之间的相互作用。通过测定WT、△tssJ和△rpoN的生长曲线,发现三种菌株的生长趋势一致,并且都在22h达到生长极限;三者生长速度比较结果为WT>△tsJ>△rpoN。WT、△ tssJ和△rpoN的泳动能力为WT>△tssJ>△rpoN;鞭毛染色试验比较结果为WT的尾部着生一根鞭毛,而△tssJ和△rpoN两菌株均未观察到其鞭毛,这些结果表明,rpoN同tssJ一样,可促进溶藻弧菌的鞭毛形成。WT、△tssJ和△rpoN的胞外水溶性和水不溶性多糖检测结果表明,水溶性多糖含量为△tssJ>△rpoN>WT,水不溶性多糖含量为WT>△tssJ>△rpoN,这表明rpoN基因对溶藻弧菌的水溶性胞外多糖形成能力具有负调控作用,且作用能力小于tssJ;而对其水不溶性胞外多糖形成能力具有正调控作用,且作用能力大于tssJ。60h内的生物膜形成量为WT>△tssJ>△rpoN,推测rpoN也参与了溶藻弧菌生物膜的形成过程,并且对其形成可能存在正调控作用,且其作用强于tssJ。总之,本文通过基因敲除技术,获得了溶藻弧菌HN08155的rpoN的缺失株,通过表型比较分析,确定rpoN基因对溶藻弧菌鞭毛、水不溶性多糖和生物膜的形成具有正调控作用,且很可能是tssJ的下游调控基因。因此,rpoN为溶藻弧菌的重要毒力相关基因。本文的结果为今后系统阐述溶藻弧菌的分子致病机理和制备其基因缺失减毒活疫苗奠定了重要基础,意义重大。