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背景当今世界的主要致盲性眼病包括青光眼和糖尿病视网膜病变等眼部疾病。青光眼所致的持续性高眼压和糖尿病视网膜病变的血管损伤,均可使视网膜处于缺血状态,进而使谷氨酸在视网膜中的浓度增高,而过多的谷氨酸可造成视网膜兴奋性毒性。由此可见,谷氨酸诱导的视网膜兴奋性毒性是青光眼和糖尿病视网膜病变等致盲性眼病的共同病理状态。文献报道,a-黑素细胞刺激素(α-MSH)可拮抗谷氨酸兴奋性毒性而导致的脑部海马神经元凋亡和胶质细胞反应性增生。目的建立鸡胚视网膜组织块培养体系,并在国内首次利用该培养体系研究α-MSH对谷氨酸引起的视网膜兴奋性毒性的保护作用。方法用胚胎第9天(E9)的鸡视网膜建立组织块培养体系。分别收集体外培养第3、5、7天的视网膜组织块及第12、14、16天(E12、E14、E16)的鸡胚视网膜各3块进行常规苏木精-伊红染色,观察各标本的视网膜形态及组织结构,并用实时PCR法分别检测不同培养时间点视网膜组织块中α-MSH受体(MCRs)表达量的动态变化。然后将视网膜组织块分为谷氨酸刺激组、α-MSH+谷氨酸刺激组以及正常培养组,分别用谷氨酸及α-MSH+谷氨酸处理48h,用TUNEL染色法检测各组视网膜组织块中细胞凋亡情况并进行定量分析；实时PCR法检测各组视网膜组织块中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果1.培养3、5、7d视网膜组织块中各层组织结构与E12、E14和E16的视网膜组织结构相同。2.MC1R mRNA在E9、E12、E14和E16鸡视网膜中的表达量明显低于出生后1d,差异均有统计学意义(P=0.001)；而MC5R mRNA在E9表达量明显低于E12及E14(均P=0.000),但此后从E14至P1则逐渐降低；而MC1R mRNA和MC5R mRNA在培养不同时间的视网膜组织块中的表达量呈现同样的规律。3.TUNEL染色显示谷氨酸刺激鸡胚视网膜组织48h后,视网膜内核层和节细胞层细胞大量凋亡,外核层亦有少量凋亡细胞,DAPI染色结果表明视网膜各层排列紊乱,但α-MSH+谷氨酸刺激组视网膜结构比较规则。定量结果表明,谷氨酸刺激组鸡胚视网膜每张切片的平均凋亡细胞数量为(600.80±24.19)个,α-MSH+谷氨酸刺激组为(61.80±15.77)个,正常对照组为(72.4±12.93)个,各组凋亡细胞总体比较差异有统计学意义(F=1422.89, P=0.000); α-MSH+谷氨酸刺激组凋亡细胞数量明显少于谷氨酸刺激组,差异有统计学意义(P=0.000)。4.谷氨酸刺激组视网膜组织块中GFAP mRNA的相对表达量为2.23±0.06,a-MSH+谷氨酸刺激组为1.14±0.15,正常对照组为1.05±0.04,处理组间总体差异有统计学意义(F=82.216,P=0.000)。谷氨酸刺激组GFAP mRNA的表达量是正常对照组的2.1倍,且差异有统计学意义(P=0.000)。α-MSH+谷氨酸刺激组的GFAP表达较谷氨酸刺激组显著下调(P=0.000),但与正常对照组相比差异无统计学意义(P=0.553)。结论a-MSH在视网膜组织块中大幅度减轻谷氨酸诱导的兴奋性毒性,这种保护作用可能是通过抑制谷氨酸诱导的胶质细胞反应性增生而引起的。本研究为进一步研发针对青光眼和糖尿病视网膜病变这两大致盲性眼病的神经保护制剂奠定了初步的理论和实验基础。