聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction PCR)是一种模拟DNA聚合酶在体内的催化作用,在体外快速扩增特定DNA片段的技术,是现代分子生物学最重要的手段之一。1985年美国Cetus公司人类遗传部的KaryMullis等利用Klenow DNA聚合酶建立了该项技术。此项技术一经问世就因其操作简便、快速、灵敏度高、特异性强和对样品的耐受性好等优点迅速在与生物学相关的学科领域得到广泛应用,并不断发展和完善。 聚合酶链式反应存在扩增产物的忠实性和可扩增产物的大小两个主要限制因素,二者均对PCR效率有较大的影响,而影响上述两因素的关键是催化PCR反应的聚合酶。 早期应用于PCR的DNA聚合酶是Klenow片段,其缺点是在60℃时很快就失活,故每一轮PCR都需要追加Klenow DNA聚合酶,使PCR过程繁琐而复杂,因而限制了PCR技术的发展。 Taq DNA聚合酶是第一个应用于PCR技术的热稳定DNA聚合酶,该酶的引入使得PCR过程实现了自动化,但是Taq酶的一个重要缺陷是没有3′-5′核酸外切酶活性,在PCR反应过程中不能切除错误参入的单核苷酸,故不能很好保证其扩增产物的忠实性。 在发现Taq DNA聚合酶之后,人们又陆续发现了Vent、Deep、Pfu、