【摘 要】
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背景和目的:系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的多器官损害的自身免疫性疾病,其特征为自身反应性T、B淋巴细胞功能亢进,产生大量的自身抗体和损伤因子,造成多器官免疫损伤,其基
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背景和目的:系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的多器官损害的自身免疫性疾病,其特征为自身反应性T、B淋巴细胞功能亢进,产生大量的自身抗体和损伤因子,造成多器官免疫损伤,其基本的病理改变是炎症、脉管炎、免疫复合物沉积和血管病变。SLE的病因不明,发病机制至今尚未明确。目前所知SLE的发生是多种复杂的遗传因素与环境因素相互作用的综合体现,与多种基因的异常表达和遗传易感性有关。T细胞功能异常在SLE发病中有重要的作用,研究表明SLE实际上是一种T细胞依赖性自身免疫性疾病。为探讨T细胞在SLE中免疫应答与免疫调节机制方面的紊乱,本实验室使用长片断基因表达序列分析技术(LongSAGE)构建了SLE患者CD4~+和CD8~+T细胞表达基因文库,通过基因功能聚类分析来发现T细胞表达基因与SLE发病的有关信息。本实验利用Long-SAGE标签产生长片段cDNA应用于基因识别技术(generation of longer cDNA fragments from serial analysis of gene expression (SAGE) tags for gene identification, GLGI),对标签库中单一匹配标签和无匹配标签进行扩增以获得标签所代表的从标签至mRNA-3′端的基因序列并进行测序。生物信息学分析筛选出可能参与SLE发病的基因,并对该基因在SLE疾病活动指数(SLEDAI)不同的患者中进行表达分析,以初步探讨该基因在SLE发病中的作用。方法:收集23例SLE患者及10例正常对照外周血20ml,通过免疫磁珠的方法分离外周血CD4+、CD8+T细胞并计数,分别提取各样本的总RNA。使用GLGI方法扩增LongSAGE标签,所得长片段进行测序分析并进一步筛选获得γ干扰素诱导蛋白30基因(IP-30),将IP-30在不同SLEDAI的患者CD4~+T细胞mRNA中进行表达分析。结果:1、实验成功采用免疫磁珠法分离23例SLE患者及10例正常对照外周血CD4~+、CD8~+T细胞,流式细胞仪检测纯度达90%以上。2、筛选了本实验室前期建立的SLE LongSAGE标签库中单一匹配标签12个和无匹配标签20个进行验证。在适当的PCR循环条件下将下游引物锚定为
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