论文部分内容阅读
双特异性磷酸酶是酪氨酸磷酸酶中的一个新的亚类,成员既能对磷酸化酪氨酸去磷酸化,也能对磷酸化丝/苏氨酸去磷酸化。DUSP18(双特性磷酸酶18)是一种atypical DUSP(非典型性双特异性磷酸酶),在几乎所有细胞系和组织中都有表达,细胞定位实验显示DUSP18在细胞核和细胞质中都存在而且不随胞外刺激改变。实验证明DUSP18(?)(?)够与JNKla1、JNK1b1和.(NK3a1三种亚型相互作用并使这些JNK亚型去磷酸化。HEK293细胞中的DUSP18在无血清培养18小时并以10%血清刺激15 min条件下表达量上升约3倍,与JNK表达量的上升幅度接近。DUSP18表达受到JNK磷酸化水平的调控,单纯高表达JNK而不对其进行磷酸化刺激并不能上调DUSP18的表达量；反之,通过特异性抑制剂SP600125对JNK磷酸化的抑制,在相同的血清刺激条件下DUSP18的表达量没有出现显著上调,验证了DUSP18是JNK通路负调控因子的假设。相同血清刺激条件下,DUSP18 RNA干扰使细胞凋亡比例增加,外源高表达DUSP18(?)(?)能够减少刺激带来的凋亡,但是正常细胞中外源高表达DUSP18则会促进细胞凋亡。DUSP18的表达量变化并不能改变肿瘤细胞的生长速度。为了寻找DUSP18除JNK以外的相关通路,我们首先通过JAK/STAT通路磷酸化抗体芯片检测了DSUP18外源高表达的影响,证明DUSP18对该通路有着显著的影响,结合细胞凋亡实验结果,我们选择了涉及凋亡绝大部分通路的凋亡磷酸化抗体芯片检(?)(?)DUSP18的胞内作用,结果显示,DUSP18还能够影响PTEN/PI3K/Akt、IKK/NF-κB、P53等通路。我们还通过体外、体内结合实验初步验证了DUSP18与LGAL3、PRDX1、TFG和IMPDH2的相互作用。综上,我们对人类双特异性磷酸酶18(DUSP18)的功能尤其是对细胞凋亡的作用进行了研究,结果显示DUSP18是体内JNK的负调节因子,并能通过多条重要信号通路对细胞凋亡产生影响,很可能对细胞其他重要生理过程有着重要的调控作用。