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本试验以天环食品有限公司下属屠宰场废弃的猪卵巢卵母细胞为试验材料,对猪卵母细胞体外受精(IVF)、猪第二极体(PbII)的鉴别、采集、保存、重组和重组胚胎体外发育等进行相关研究,期望初步建立一套猪PbII的采集、保存、重组、重组胚胎体外发育的系统技术,为进一步开展猪和其他动物基因资源的研究及利用奠定基础。
取得主要结果如下:
1 本实验以屠宰场废弃的猪卵巢卵母细胞为实验材料,探讨了猪卵母细胞受精后PbII的排出规律,并且对PbII活性、形态学变化及其保存进行了相关研究。试验证明,受精后16-20h 是PbII 最佳的采集时间;PbII的短期保存一般可用-20℃冰箱;长期液氮保存,可获得87%的存活率。
2 本实验通过不同猪卵母细胞体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了相关研究。试验证明,卵母细胞体外成熟培养(IVM)24h 左右,受精后基本上没有卵裂发生,体外成熟培养44h左右,受精后卵裂率达到41.3%。继续培养,受精后卵裂率下降,体外成熟培养74h 左右,体外受精后基本上没有卵裂现象。体外受精一般在卵母细胞体外成熟培养40-44h 左右进行,精子获能时间应控制在1h-2h 左右,精卵共孵育时间应在6h 以上不要超过8h。
3 本实验对猪PbII 重组原核胚进行了相关研究。实验结果表明,PbII 重组,选择在受精后16-20h 去雌原核。用显微操作法获取PbII,选择在NCSU-23操作液中进行PbII 重组工作,重组后应进行电激活。可得到19.4%的卵裂率,冷冻后重组卵裂率在14.3%左右。