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第一部分中药复方抗纤灵对大鼠单侧输尿管梗阻模型所致肾纤维化的防治作用
目的:观察和研究中药抗纤灵对模型大鼠的血肌酐、尿素氮以及患侧肾组织形态学的影响。
方法:采用SD大鼠行单侧输尿管结扎手术制作肾间质纤维化模型,并灌服浓缩抗纤灵水煎剂,26只大鼠分为对照组(n=5)、模型组(n=8)、抗纤灵组(n=8)、假手术组(n=5),采用全自动生化分析仪进行肾脏主要功能观测,于28天全部处死取肾,以常规HE染色和特殊PASM、胶原染色做肾组织病理学检查,观察抗纤灵对肾组织纤维化的影响。
结果:在实验观察中的各个时间点,抗纤灵组大鼠与及正常组、假手术组大鼠血肌酐值及尿素氮值有显著差异(P<0.01),模型组大鼠有高于抗纤灵组大鼠(P<0.05)。模型组肾小管和肾小球基底膜严重增厚,治疗组肾小管和肾小球基底膜可见增厚。治疗组肾小球、肾小管形态损坏程度、炎细胞浸润及胶原沉积均弱于模型组。
结论:(1)大鼠UUO模型,模型组血肌酐、尿素氮明显升高,中药抗纤灵可降低其值。(2)模型组肾小管和肾小球基底膜严重增厚,中药抗纤灵可减轻其病变。(3)该动物模型有严重肾小球、肾小管形态改变,大量炎细胞浸润及胶原沉积,中药抗纤灵可有效保护肾小球、肾小管形态,减少炎细胞浸润及胶原沉积。
第二部分.抗纤灵大鼠血清对肾小管上皮细胞株HK-2的细胞增殖率和ERK、JNK、P38、c-Met的mRNA和蛋白水平以及蛋白磷酸化的影响。
目的:探讨抗纤灵动物血清对HK-2细胞的细胞增殖率以及由HGF诱导的MAPK信号通路的影响。
方法:体外培养人源性肾小管上皮细胞HK-2,应用Westernblot检测肾小管上皮细胞内信号转导分子ERK、JNK、P38、c-Met的蛋白表达及ERK、JNK、P38磷酸化水平的影响。应用RT-PCR检测ERK、JNK、P38、c-Met的mRNA水平。应用Alarmblue检测细胞增殖率。
结果:细胞增殖率结果显示,抗纤灵动物血清对HK-2细胞增殖率没有显著影响。
Westernblot结果显示,与空白对照组及正常动物血清干预组比较,抗纤灵动物血清对HK-2细胞内信号转导分子ERK、JNK、P38的蛋白表达水平无明显影响,ERK、JNK、P38蛋白表达的磷酸化水平明显提高,c-Met的蛋白表达水平明显提高。
RT-PCR结果显示:与空白对照组及正常动物血清干预组比较,抗纤灵动物血清对HK-2细胞内信号转导分子ERK、JNK、P38的mRNA表达水平无明显影响,c-Met的mRNA表达水平明显升高。
结论:
1抗纤灵药物血清不激活体外的培养人源性肾小管上皮细胞HK-2的增殖。
2抗纤灵药物血清可提高体外培养的人源性肾小管上皮细胞HK-2内HGF受体c-Met的蛋白及mRNA表达水平。对HK-2细胞内信号转导分子ERK、JNK、P38的蛋白及mRNA表达水平无明显影响,明显上调ERK、JNK、P38的蛋白磷酸化水平。