论文部分内容阅读
转基因技术的应用使转基因作物种植面积不断加大,因此对转基因作物进行安全性评价显得尤为重要。根际土壤微生物是生态系统中的重要参与者,它的消长影响着植物病害的发生。本研究对转基因抗病毒、抗毒素、抗旱小麦根际土壤中镰刀菌、禾谷多黏菌含量进行绝对定量,建立了实时荧光定量PCR (Real-Time Q PCR)检测体系。应用该反应体系,对转基因小麦各个生长时期的镰刀菌、禾谷多黏菌拷贝数进行绝对定量。由于土壤中微生物成分较多且很复杂,且土壤真菌DNA的提取一直是真菌分子生态学上研究所面临的难题。使用常规的方法难以对其进行纯培养,不能有效的反映出全部微生物的变化形态,并且对经纯培养的菌定量不能反映自然状态菌的真实含量。因此我们采用分子生物学的方法,提取土壤真菌总DNA后,再对其中的镰刀菌、禾谷多黏菌进行Real-Time Q PCR扩增定量,从而得到这两种菌的数量(拷贝数),以此来分析转基因小麦根际土壤中这两种菌的数量变化。通过不同方法对土壤中真菌DNA进行提取,发现使用试剂盒Ⅱ (UltraCleanTM soil DNA Isolation Kit)方法所提土壤真菌总DNA的质量较高,条带清晰。对小麦根际土壤中镰刀菌、禾谷多黏菌进行实时荧光定量PCR定量后,与非转基因小麦对比可以看出,转基因小麦对镰刀菌的整体抑制作用总体不显著,镰刀菌在小麦的整个生长时期呈正态分布曲线。其中转TaDREB4基因抗旱小麦(TB4)株系与转Tri101基因小麦(DS)株系对镰刀菌有一定的抑制作用,而高抗小麦黄花叶病转WYMV-Nib8基因小麦株系(N12-1)则对镰刀菌无明显抑制作用。高抗小麦黄花叶病转WYMV-Nib8基因小麦株系(N12-1)对禾谷多黏菌有一定抑制作用,其他两个转基因小麦品种则无明显抑制作用,这也与高抗小麦黄花叶病转WYMV-Nib8基因小麦株系(N12-1)的抗病原理相符合。本研究所得结果均为小麦一年生长数据,如需可靠结果,则需整合3-5年小麦生长数据结果加以分析。