As<,2>O<,3>诱导HeLa细胞凋亡的分子机制研究

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目的:用As<,2>O<,3>诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡,检测As<,2>O<,3>对HeLa细胞端粒酶活性及HPV18 E6基因的影响,探讨As<,2>O<,3>诱导HeLa细胞凋亡的分子机制;了解维生素C是否能协同As<,2>O<,3>诱导HeLa细胞凋亡的作用,为临床治疗宫颈癌提供新思路.方法:采用不同浓度的As<,2>O<,3>作用于人宫颈癌HeLa细胞不同时间段后,用MTT法、光学显微镜观察、电镜、流式细胞仪等方法检测As<,2>O<,3>对HeLa细胞生长抑制作用和诱导细胞凋亡作用,用端粒酶重复片断扩增-酶联免疫法(TRAP-ELISA)测定细胞内端粒酶变化情况,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定HPV18 E6致瘤基因的表达.采用维生素C和As<,2>O<,3>联合处理HeLa细胞观察凋亡情况,测定端粒酶活性的变化.结果:2μmol·L<-1>As<,2>O<,3>处理HeLa细胞48h后,细胞生长受到抑制,出现较多凋亡细胞,并经电镜证实,随着As<,2>O<,3>浓度增加和作用时间延长,这一作用明显增强.流式细胞仪分析表明:2μmol·L<-1>As<,2>O<,3>作用48h后,G1期前面出现明显的亚二倍体峰(凋亡峰),随着剂量增加,凋亡率增加.2μmol·L<-1>As<,2>O<,3>作用48h后,端粒酶活性受抑,2μmol·L<-1>As<,2>O<,3>作用48h后,HPV18 E6表达受抑制.维生素C和As<,2>O<,3>联合处理较单一As<,2>O<,3>处理HeLa细胞后,细胞凋亡率增加,端粒酶活性抑制更明显.结论:1.2μmol·L<-1>-10μmol·L<-1>As<,2>O<,3>可抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡.2.As<,2>O<,3>可抑制HeLa细胞端粒酶活性,抑制端粒酶活性为As<,2>O<,3>诱导HeLa细胞凋亡的机制之一,As<,2>O<,3>可下调HeLa细胞HPV18 E6的表达,E6表达与端粒酶活性之间存在相关性.3.维生素C通过协同As<,2>O<,3>抑制HeLa细胞端粒酶活性强化其诱导凋亡作用,小剂量维生素C联合As<,2>O<,3>可望成为临床治疗宫颈癌的一种选择.
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