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副干酪乳杆菌HD1.7 (L.paracasei HD1.7)产生的抗菌肽Paracin 1.7,对多种革兰氏阳性细菌(G+)、革兰氏阴性细菌(G-)以及酵母菌都有抑制作用,可作为新型食品防腐剂。本文通过Plackett-Burman设计和响应面(RSM)分析对L.paracasei HD1.7发酵产生Paracin 1.7的培养基进行了优化。首先通过PB设计从8个因素中筛选出了有显著影响的葡萄糖、硫酸镁、硫酸锰3个因素,然后通过最陡爬坡和Box-Behnken设计进一步优化,并利用JMP 7.01软件进行回归分析,得到以上3个因素的最佳浓度分别为(g/L):葡萄糖6.5685、硫酸镁0.454、硫酸锰0.01052。在优化后的培养基下,Paracin 1.7效价达到141.648 AU/mL,比优化前(74.13 AU/mL)提高了1.91倍。本实验用自杀质粒pUC18-prcR-tet,对影响L.paracasei HD1.7电转化的几个主要因素进行了初步研究,建立了较优化的电转条件:当L.paracasei HD1.7生长8h时,加入青霉素使终浓度为12.5μg/mL,再培养1h。经AEB1电转缓冲液(蔗糖浓度为0.3mol/L)处理后,在1.8~2.0 kv电压下完成电击,并迅速加入MRS培养基中,复苏5h。最后得到了最佳的电转化条件。抗菌肽的生成过程具有群体效应(QS)的特征,prcR是群体效应过程中调节因子的编码基因。通过电转化将自杀质粒pUC18-prcR-tet导入L.paracasei HD 1.7,经基因敲除技术,获得prcR突变株,对能在Tet平板上生长的菌株进行PCR验证,最后证明,突变菌株表现出了四环素抗性,质粒pUC18-prcR-tet已被转入L.paracasei HD1.7中,但没有在指定位置发生同源重组。通过抑菌试验观察突变株的抑菌情况发现,突变株要比原始菌株的抑菌程度弱,这说明突变株中影响抗菌肽的相关基因有所变化,进而影响了抗菌肽的生成。本文对L.paracasei HD1.7产Paracin 1.7进行了研究,通过优化培养基成分使Paracin 1.7产量得到提高。并通过电转化方法对影响群体效应的调节基因prcR进行了探索。这些研究为以后工业化生产抗菌肽,广泛应用于食品药品、探讨乳酸菌群体效应现象以及研究抗菌肽基因的克隆表达等工作奠定了基础。