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目的:研究不同浓度地塞米松对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)表达的影响和炎症因子分泌的干预作用,进一步探讨地塞米松对肺脏的保护机制。
方法:通过在体支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞(AM)。经瑞氏-吉姆萨染色鉴定纯度和台盼蓝染色鉴定细胞活力后,将Ams共分为六组:正常对照组(Control):加入新鲜培养基;内毒素组(LPS):加入100ng/ml内毒素;地塞米松组(Dex):加入地塞米松10-5mol/L;地塞米松干预组1(LPS+Dex10-6):加入LPS100ng/ml和地塞米松10-6mol/L;地塞米松干预组2(LPS+Dex10-7):加入LPS100ng/ml+地塞米松10-7mol/L;地塞米松干预组3(LPS+Dex10-8):加入LPS100ng/ml+地塞米松10-8mol/L。分别于刺激后1、2、4、8、12、24 h收集细胞,提取蛋白,用Western blot法检测AMs中NF-κBp65的水平;同时收集培养上清,用ELISA检测试剂盒检测培养上清中TNF-α和IL-10蛋白表达水平。
结果:与正常对照组相比,LPS组NF-κB表达显著增加(P＜0.01),TNF-α及IL-10的含量明显增高(P＜0.01);地塞米松组NF-κB p65表达及TNF-α及IL-10的含量明显降低(P＜0.05);地塞米松干预组(10-6mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L)呈剂量依赖性抑制NF-κB p65表达及TNF-α和IL-10的分泌(P＜0.05),地塞米松干预组10-6mol/L时治疗作用比较理想。
结论: LPS作用于AMs后,NF-κB p65表达显著增加,TNF-α和IL-10含量明显增高。地塞米松能明显抑制NF-κB p65的表达,减少TNF-α和IL-10的分泌,且具有剂量依赖性,其中地塞米松10-6mol/L干预时治疗作用比较理想。