扁桃酸氧化还原酶的筛选及应用研究

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本文通过建立筛选模型,从土壤中分离得到五株微生物,分别为:选择性氧化(S)-扁桃酸为苯甲酰甲酸的芽孢杆菌HR01、节杆菌HR02和杆菌HR04能选择性降解外消旋体中的(S)-对映体而得到(R)-扁桃酸的芽孢杆菌HR08;以及能选择性降解外消旋体中的(R)-对映体而得到(S)-扁桃酸的恶臭假单胞菌ECU1009。发现消旋扁桃酸、苯甲酰甲酸和苯甲酸对Ps.putida ECU1009(R)-扁桃酸氧化酶/脱氢酶的生物合成有明显的诱导作用;对其细胞转化条件进行了优化,确定最适pH和温度分别为pH 6.0~6.5和30℃,底物最佳浓度为60 mM。对Ps.putida ECU1009细胞内(R)-扁桃酸氧化还原酶进行了部分纯化,初步确定该酶为NAD+依赖型。以Bacillus sp.HR08细胞为催化剂,制备得到了(R)-扁桃酸纯品。以P.putida ECU1009细胞为催化剂,制备得到了光学纯(S)-扁桃酸及其三种苯环取代衍生物的(S)-型光学纯对映体。还发现本实验室分离保藏的红酵母具有选择性还原苯甲酰甲酸甲酯为(R)-扁桃酸甲酯的能力。利用双菌(杆菌HR04和Rhodotorula sp.AS2.2241)组合并结合化学方法,可将消旋扁桃酸完全转化为(R)-扁桃酸甲酯。
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