Elongator复合物在60Coγ射线诱导的肝癌细胞DNA损伤修复中的作用

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目的:研究Elongator复合物对60Coγ射线辐照诱导的肝癌细胞DNA损伤修复的影响,探讨在肝癌发生和发展过程中Elongator对肝癌细胞基因组发挥保护作用的分子机制。方法:1.RT-PCR检测肿瘤细胞中内源性elp3和elp4 mRNA的表达量。2.以OTM值为指标,用彗星电泳检测辐照后各组细胞的DNA损伤程度。3.以γ-H2AX为指标,用免疫荧光法和Western blot进一步确认辐照后各组细胞在不同时间点的DNA损伤程度和蛋白表达变化情况。4.流式细胞仪检测辐照后各组细胞的凋亡率。5.实时荧光定量PCR检测各组细胞中RAD50、Mre11、Nbs1、ATM、ATR、 DNAPK-cs、Chk1、Chk2、XRCC6、 BRCA1、GADD45G和CDC25A等损伤修复相关基因的表达水平。6. Western blot检测各组细胞中RAD50、Mre11和XRCC6等损伤修复相关蛋白的表达水平。结果:1. RT-PCR检测结果发现,内源性elp3和elp4 mRNA在不同肿瘤细胞株中均有表达,但相对表达量并没有显著变化。2.彗星电泳检测结果显示,与对照组HepG2/SK-Hep-1细胞组相比较,Elongator过表达组中OTM值明显减小,而Elongator干扰组中OTM值明显增加,从而说明Elongator复合物能够减轻肝癌细胞DNA损伤程度,对保护细胞DNA免受60Coγ射线辐照造成的损伤是非常关键的。3.免疫荧光分析和Western blot的实验结果显示,与对照组HepG2细胞组相比较,Elongator过表达组中单个细胞内含γ-H2AX的荧光数随着辐照后时间的推移显著减少,而Elongator干扰组中γ-H2AX的荧光数显著增多,这说明表达Elongator能够降低DNA损伤程度,并且对DNA损伤具有一定的修复作用,从而验证了彗星电泳的结果。4.流式细胞仪检测结果发现,与对照组HepG2细胞组相比较,Elongator过表达组的细胞凋亡率明显减少,而Elongator干扰组的凋亡率有所增加,这说明Elongator能够降低细胞凋亡率,从而维持基因组的稳定性。5.实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞中DNA损伤修复相关基因和蛋白的表达情况,根据实验结果推测Elongator对DNA损伤的修复作用可能是通过RAD50、 Mre11、Nbs1、DNAPK-cs、XRCC6等因子作用完成的。结论:1. Elongator复合物能够减轻由于60Coγ射线辐照引起的肝癌细胞DNA损伤程度,并降低细胞凋亡率,表明Elongator对DNA损伤具有一定的修复作用,从而维持基因组的稳定性。2. Elongator对DNA损伤的修复作用可能是通过RAD50、Mre11、 Nbsl、 DNAPK-cs、XRCC6等修复相关基因作用完成的。
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