【摘 要】
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该研究以水稻品种TP309和番笳品种Moneymaker为受体材料,pBI121和pBG为外源DNA,研究和探讨了高渗转化法这一植物基因转化新技术,取得了以下主要结果:以番茄和水稻为材料,研究
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该研究以水稻品种TP309和番笳品种Moneymaker为受体材料,pBI121和pBG为外源DNA,研究和探讨了高渗转化法这一植物基因转化新技术,取得了以下主要结果:以番茄和水稻为材料,研究了高渗转化受化类型和受体再生系统的建立,结果表明,番茄幼叶和水稻幼穗在MS+2,4-D 2mg/l培养基上诱导的愈伤组织符合转化的要求,两种转化受体再生的培养分别以MS+6-BA 4mg/l+IAA4mg/l和MS+Kt2.0mg/l+IAA0.2mg/l培养基较好.0.75M蔗糖溶液高渗处理水稻与番茄愈伤组织长达4小时,细胞仍然保持活力.蔗糖溶液高渗处理及处理后的低渗处理明显抑制愈伤组织的芽的分化,分化率和平均出芽数均减少,分别比对照低5~30﹪和0.1~0.90.通过对转化受体的Kan筛选,发现水稻愈伤组织对Kan不敏感,而番茄愈伤组织在Kan浓度为50mg/l时已没有芽的分化能力.将番茄和水稻愈伤组织置于含pBI121或pBG质粒和鲑鱼精子DNA的0.75M的甘露醇或蔗糖溶液中,高渗处理4小时,随后往转化溶液中加入等体积的0.2M的CaCl<,2>溶液或40﹪PEG溶液,经培养和检测后,结果表明,转化后的番茄愈伤组织生长速度减慢,甘露醇的抑制作用比蔗糖强;GUS瞬间表达率平均为38.9﹪,培养20天后GUS表达率平均为19.2﹪,PEG介导的高渗转化使番茄愈伤组织的GUS瞬间表达率降低了5﹪;水稻种胚愈伤组织与幼穗愈伤组织的GUS瞬间表达率、甘露醇和蔗糖转化的GUS瞬间表达率相差不大,但是,20天后,蔗糖转化的GUS表达率比甘露醇高2.4﹪;通过Basta(10mg/l)的筛选,番茄和水稻抗性愈伤组织分别各自处理愈伤组织的9.61﹪和13.65﹪;80﹪的水稻Basta抗性愈伤组织检测到GUS基因的稳定表达,按外植体总数算,稳定化率达10.92﹪;番茄Basta抗性愈伤组织分化培养后,共得到29个Basta抗性芽,抗性率为9.29﹪.
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