肿瘤多药耐药是指肿瘤细胞对多种结构和功能完全不相关的药物产生抗性的现象，是目前肿瘤化疗成功的主要障碍之一。许多肿瘤对化疗药物具有先天的抵抗作用，而其它一些癌症在接受化疗后也会产生获得性耐药现象，这种多药耐药现象会减轻大多数化疗药物的药效，成为了临床化疗成功的瓶颈。因此，肿瘤多药耐药逆转剂的研究与开发已成为抗肿瘤研究的首要任务。临床出现的肿瘤多药耐药由多种因素所导致：在机体水平上，人体对药物的吸收、分布、代谢及消除特性会引起药效的降低：在组织水平上，肿瘤组织特殊的几何结构、通透性及其周围特殊的酸性环境也会阻止药物进入肿瘤组织；在细胞水平上，药物靶蛋白的突变、代谢通路的改变及解毒蛋白的高表达也会使肿瘤细胞逃避化疗药物的杀伤，在细胞水平多药耐药中，由于肿瘤细胞高表达ABC蛋白家族的成员蛋白并通过外排泵作用降低胞内药物浓度所引起的多药耐药现象被称为经典肿瘤多药耐药。在过去的几十年中，人们对肿瘤多药耐药的研究一直集中于对经典多药耐药的研究。P-gp是第一个被证明能引起经典多药耐药的外排泵蛋白，随后，MRP、BCRP等ABC蛋白家族蛋白也相继被证明与经典多药耐药相关。而P-gp一直是研究最深入的蛋白，也是肿瘤多药耐药逆转剂开发的主要靶点。迄今为止，以P-gp蛋白的外排功能为靶点的多药耐药逆转剂已经经历了三代历程，包括钙离子通道阻滞剂、钙调蛋白抑制剂、免疫抑制药物等P-gp功能抑制剂，但由于毒副作用和交叉药代动力学反应等因素临床效果不佳，并未开发出理想的逆转剂上市；近几年，越来越多的学者关注于P-gp编码基因mdr1的转录调控，希望在转录水平抑制P-gp的高表达降低P-gp的外排作用以逆转肿瘤多药耐药。本研究的目的是以mdr1基因启动子和P-gp蛋白为靶点，基于报告基因技术和荧光染料胞内积累实验技术建立稳定性好、灵敏度高的肿瘤多药耐药逆转剂高通量筛选模型，为肿瘤多药耐药逆转剂的高通量筛选工作建立平台，并对中药样品库进行高通量筛选，寻找具有逆转肿瘤多药耐药活性的中药样品。在P-gp蛋白功能抑制剂筛选模型中，培养P-gp高表达的MCF-7／ADM多药耐药抗性细胞株，用荧光染料Rho123为指示剂检测P-gp外排功能情况以计算样品对P-gp蛋白功能的抑制活性，并对中药样品库进行了高通量筛选，再用剂量—活性依赖实验和抗性增敏实验验证阳性样品的活性；在mdr1启动子抑制剂筛选模型中，首先以人肝癌细胞HepG2基因组为模板，PCR扩增mdr1启动子-434-+158区，构建mdr1-luc+重组质粒，并转染HepG2中，通过检测启动子下游荧光素酶报告基因的表达情况计算样品对启动子的抑制活性，并对中药样品库进行了高通量筛选，再用剂量依赖实验和RT-PCR验证阳性样品的活性。经过实验优化，P-gp蛋白功能抑制剂筛选模型Z’因子为0.72，mdr1启动子抑制剂筛选模型z’因子为0.65，证明模型稳定性好、灵敏度高。通过对中药样品库的筛选，分别鉴定两种中药样品具有较高的体外活性。本研究工作为肿瘤逆转剂的筛选与开发建立了平台，使肿瘤逆转剂的大规模高通量筛选成为可能。然而，更新更好的药物发现需要大规模的包含丰富化合物结构的化合物库作为基础，才能发现理想的化合物结构应用于药物开发，因此，理想肿瘤逆转剂的开发仍需大规模的筛选工作。另一方面，中药粗提物与上市药物仍有很大的距离，需尽可能的分离纯化活性组份，并尽可能揭示其作用机理才能进一步优化最终开发成理想的临床药物。因此，本研究为耐药逆转剂的开发打下基础，但肿瘤多药耐药的攻克仍需坚持不懈的努力。