【摘 要】
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目的: 1.研究血管抑素Angiostatin基因对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其相关机理。 2.研究血管抑素基因联合化疗药物顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3诱导的裸鼠腹腔肿
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目的: 1.研究血管抑素Angiostatin基因对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其相关机理。 2.研究血管抑素基因联合化疗药物顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3诱导的裸鼠腹腔肿瘤和腹水的抑制作用及其相关机理。 方法: 使用BALB/C遗传背景的雌性裸小鼠作为实验动物,4-5周龄,按SPF级饲养。人卵巢上皮癌细胞株SKOV3用含有10%小牛血清的RPMI medium 1640在37℃、5%CO2条件下培养。收集肿瘤细胞,调整细胞悬液浓度。于裸鼠背部皮下注射细胞悬液0.2ml(细胞总数约为5×106个),裸鼠腹腔内注射细胞悬液0.2ml(细胞总数约为1×107个),建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤和腹水瘤动物模型。血管抑素基因真核表达质粒采用分子生物学方法大量制备,转染细胞时以阳离子脂质体DOTAP作为介导。 皮下移植瘤实验:将荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、空质粒组和基因治疗组,待肿瘤生长至直径约0.4cm时,分别向瘤体内注射无菌生理盐水、空质粒pcDNA3、Angiostatin/pcDNA3。观察各组裸鼠的肿瘤生长曲线,21天后取肿瘤标本作免疫组织化学检查(SABC法)及蛋白质印迹(Western Blotting)检查,检测各组肿瘤组织中Angiostatin、VEGF的表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。
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