目的：肿瘤分子生物学和分子遗传学的研究表明原癌基因的激活、抑癌基因的失活和细胞凋亡基因的缺失是许多肿瘤的发生机制。结肠癌的发生发展是一个涉及多种基因参与、多步骤的复杂过程，伴有多种原癌基因和抑癌基因表达与活性异常。FHL2(Four and a half LIM protein 2)是仅有LIM结构域的蛋白质，属于LIM蛋白家族成员。LIM结构域存在于很多蛋白质中并具有扮演多种细胞角色，如调节基因表达，维持细胞结构，介导细胞粘附，细胞运动和信号传导。人类四对半LIM结构蛋白质中的家庭成员包括FHL1，FHL2，FHL3，FHL4和ACT。它们在辅助细胞与组织特异性表达并参与不同细胞的病变，包括细胞存活的调节，转录和信号转导等。目前研究最多的是FHL2，FHL2蛋白主要位于细胞核并能在细胞质和细胞核之间穿梭。是一种适应蛋白，能与多种靶蛋白结合并调控后者的活性，FHL2基因与肌细胞成熟与分化的研究较多，但与肿瘤研究较少。有研究提示在乳腺癌和黑色素瘤中表达升高，但是在消化道肿瘤病例还没有研究。本研究探讨了FHL2基因在大肠癌组织中的表达，及它在细胞分化和肿瘤生长中的作用，评价了抑制FHL2基因在控制肿瘤细胞生长中的作用。方法：1、临床标本中FHL2蛋白的表达检测：收集南方医院消化内科病理室2005年6月～2005年12月住院病人肠镜活检的资料完整的病理标本50例，(1)用免疫组织化学方法检测FHL2蛋白在大肠癌组织中的表达：检测高分化腺癌20例、低分化腺癌15例，以及15例正常结肠粘膜组织，分析FHL2表达与相关临床病理因素的关系，所有患者术前均未做放疗、化疗及免疫治疗；(2)Westernblotting检测结肠癌组织和癌旁组织中FHL2蛋白的表达。2、抑制FHL2基因对大肠癌细胞分化的影响：(1)用Western blotting检测不同大肠癌细胞株SW620、SW1116、SW480、DLD1、HCT15、HT29、LoVo和Colo205中FHL2蛋白的基础表达；(2)建立稳定表达空载体LoVo细胞系(LoVo／Vector)和稳定表达FHL2反义基因LoVo细胞系(LoVo／FHL2-AS)并鉴定；(3)用相差显微镜观察LoVo／Vector和LoVo／FHL2-AS1细胞形态学上的表现；(4)经α-微管蛋白抗体和Hochest 22358分别标记细胞浆和细胞核，用免疫荧光显微镜观察LoVo／Vector和LoVo／FHL2-AS1细胞骨架与细胞核的变化；(5)用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测LoVo／Vector、LoVo／FHL2-AS1和LoVo／FHL2-AS2中细胞分化指标癌胚抗原(CEA)和上皮细胞钙粘蛋白(E-Cadherin)的表达；(6)经罗丹明毒肽标记LoVo／Vector和LoVo／FHL2-AS1细胞中的丝状肌动蛋白(F-actin)，用免疫荧光显微镜观察其细胞核和丝状肌动蛋白的形态变化；(7)用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测LoVo／Vector、LoVo／FHL2-AS1和LoVo／FHL2-AS2，观察大肠癌相关癌基因存活素(survivin)，环氧化酶-2(cox-2)，人端粒逆转录酶(hTERT)和c-jun mRNA的表达；(8)经不同浓度的小牛血清(FBS)培养的LoVo／Vector、LoVo／FHL2-AS1和LoVo／FHL2-AS2细胞，用噻唑蓝(MTT)法测定其对血清的增殖反应。结果用SPSS 12.0统计软件进行统计分析，采用秩和检验，并进行两两比较，P＜0.05表明有统计学意义。结果：1、临床标本中FHL2蛋白的表达检测：(1)用免疫组织化学法检测FHL2蛋白的表达，FHL2蛋白主要定位于细胞核，细胞质有少许表达，正常大肠粘膜组织中不表达或低表达，而在大肠癌组织中表达水平较高，FHL2蛋白表达水平与大肠癌分化程度负相关，分化程度越低其表达程度越高；(2) Western blotting发现FHL2在结肠癌组织中高表达，而在结肠癌旁组织中不表达或低表达。2、抑制FHL2基因对大肠癌分化影响的体外细胞实验：(1)肠癌细胞株SW620、SW1116、SW480、DLD1、HCT15、HT29、LoVo、Colo205均表达相当量的FHL2蛋白，而在部分分化的HT29细胞几乎不表达；(2)成功建立了稳定表达空载体LoVo细胞系(LoVo／Vector)和稳定表达FHL2反义基因的LoVo细胞系(LoVo／FHL2-AS)；(3)相差显微镜发现LoVo／Vector细胞形态与肿瘤细胞类同表现为多边形，部分细胞变圆不规则有较短小突起的圆型或方型，而LoVo／FHL2-AS1细胞形态与正常大肠粘膜细胞类似表现为长梭型，(4)经α-微管蛋白抗体和Hochest 22358分别标记细胞浆和细胞核，用免疫荧光显微镜观察发现与LoVo／Vector相比，LoVo／FHL2-AS1细胞变长，胞浆增大，核浆比例下降，LoVo／FHL2-AS1引起的细胞形态变化与全反式维甲酸(ATRA)相仿，提示抑制FHL2可能诱导了癌细胞的分化；(5) RT-PCR发现CEA、E-Cadherin在LoVo／FHL2-AS1中表达较LoVo／Vector明显增强；(6)用罗丹明毒肽标记LoVo／Vetor和LoVo／FHL2-AS1细胞中的丝状肌动蛋白(F-actin)，免疫荧光显微镜发现LoVo／Vector仅有少量的丛集丝状肌动蛋白，在细胞内分布不均匀呈斑块状；LoVo／FHL2-AS1则可见到均匀着色，且有微绒毛肌动蛋白形成；(7) RT-PCR发现与LoVo／Vetor对照组相比，LoVo／FHL2-AS1和LoVo／FHL2-AS2中的存活素(survivin)，环氧化酶-2(cox-2)，人端粒酶逆转录酶(hTERT)和c-jun mRNA的mRNA表达均下调；(8)噻唑蓝(MTT)法测定LoVo／Vector细胞对含有0.4％、2％和10％小牛血清(生长因子)的增殖系数分别为113.8±5％，126.4±6％和162.5±5％，而LoVo／FHL2-AS1和LoVo／FHL2-AS2细胞分别为103.3±3％，110.3±5％，115.2±9％和07.8±6％，113.5±3％，135.5±4％。结论：1、FHL2蛋白主要在大肠癌细胞核表达，而且其表达水平与大肠癌分化程度负相关，分化程度越低其表达程度越高，提示FHL2基因的表达与大肠癌恶性程度成正相关；2、抑制FHL2基因在大肠癌细胞中表达，可以使大肠癌细胞向正常细胞分化；3、抑制FHL2基因的大肠癌细胞增殖减弱，且降低了其它原癌基因的表达，提示FHL2基因可能与大肠癌发生相关，进而提示FHL2基因有希望作为大肠癌治疗的新分子靶点。