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本试验通过建立大鼠肝细胞原代培养体系，评价三种核苷类抗病毒药物对原代大鼠肝细胞的毒性作用。 分别用胶原酶和胰酶灌流获取大鼠肝细胞，通过台盼蓝拒染试验测定细胞活力并计数，进行原代培养并观察其形态变化，采用噻唑蓝（MTT）试验测定肝细胞的活性。结果显示，胶原酶分离的肝细胞数量是胰酶的2.4倍，细胞活力是胰酶的0.3倍，细胞原代培养时，活性和贴壁效果远不及胰酶。表明胶原酶分离的大鼠肝细胞虽然数量多，但是活力低，而胰酶分离的大鼠肝细胞数量虽然不及胶原酶，但是活力高，用于评价三种核苷类抗病毒药物对肝细胞的毒性作用。 以Dulbecco’s modified Eagle’s medium（DMEM）培养液调整肝细胞密度为3×105个／ml，将肝细胞分为药物组、阳性对照组、阴性对照组和空白对照组。肝细胞置37℃、5％CO2培养箱中培养4h，弃上清。药物组分别加入齐多夫定（AZT）浓度为10、5、3．3、2、0.4和0.08mmol／L，阿昔洛韦（ACV）浓度为5、2.5、1.25、0.625、0.125和0.025mmol／L，更昔洛韦（GCV）浓度为10、4、2、1、0.2和0.04mmol／L。阳性对照组加入四氯化碳（CCl4）浓度为10、2和0.5mmol／L。阴性对照组加入含1％二甲基亚砜（DMSO）的DMEM培养液。空白对照组加入DMEM培养液。分别于加样后6、12和24h检测细胞活性；并于加样6和12h取培养上清液测定天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）和尿素氮（BUN）的含量，于加样12h将细胞进行苏木素—伊红（HE）染色，观察细胞形态变化。结果显示，与阴性对照组相比，CCl4浓度高于2mmol／L时，在各时间点能显著降低细胞活性，显著增加AST、ALT和LDH的释放量，显著降低BUN的合成功能，浓度为10mmol／L时能引起细胞变小、核浓缩和核碎裂，浓度为2mmol／L时能引起细胞核浓缩。AZT浓度高于3.3