目的：探讨NF-кB在糖尿病大鼠动脉粥样硬化病变形成中的作用，以及与内皮细胞间粘附分子(intercellular adhesion mdecule-1,ICAM-1)间的关系。 方法：Wistar大鼠随机分三组：对照组(C组)、链脲佐菌素诱导的糖尿病组(DM组)、NAC治疗组(NAC组)。分别于1、2、3、4个月检测血糖、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbAlC)水平。于相应时间分别处死大鼠并分离和摘取主动脉，采用SP免疫组化或凝胶电泳迁移率(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法分别测定主动脉内皮ICAM—1的表达和NF—кB的DNA结合活性。 结果： 1、DM组、NAC组的血糖及HbAlC水平显著高于C组。 2、DM及NAC二组的TC、TG、在1、2个月无显著变化，TC、TG、在3、4个月时显著高于C组，但未达高脂血症水平。 重庆医科大学博士研究生学位论文 3、在 3、4个月时，NF—K B结合活性在 DM大鼠主动脉较对照 组明显增强，NAC组较DM组减弱。 4、饲养3、4个月时，DM组大鼠主动脉内皮ICAM—l呈强阳性 表达，NAC和 C组 ICAM—1弱表达。 5、HE染色在DM组于3、4个月时出现AS的早期病理改变，而 在NAC和 C组未发现AS的病理改变。 结论： 1．DM大鼠大血管存在NF—K B的激活，并启动下游靶基因粘附 分于ICAM—l的表达，进而导致DM大鼠动脉粥样硬化的发生与发 展。团此NF一。B的激活可能是导致DM大鼠AS的始动因子之一。 〕 抗氧化剂＊＊C可以抑制＊P一。B的激活及其凋控的粘附分 于的表达，表明抗氧化剂预防DM大鼠动脉粥样硬化的机制部分源于 对NF—K B的扣］制。 3．高血糖是NFK B个适当激活的又一囚素，囚此，早期有效n 控制血糖是防治DM鼠AS的基本策略。《第二部分 2型糖尿病大血管并发症病人PBmS中 NF－K B活性的研究 4 重庆医科大学博士研究生学位论文 目的：观察2型糖尿病病人外周血单个核细胞核转录因于M一 “B的＊＊A结合活性～3。方法：随机选择60例2型糖尿病病人，其中无大血管并发症者30 例，合并大血管病变者 3 0例，40例年龄和性别匹配的健康人作为对 照。梯度离心方法分离外周血单个核细胞0BMC人 凝胶电泳迁移率 （EMSA）方法测定 PBMCS中 NF—K B的 DNA结合活性。同时检 测血糖和血脂等生化指标。 结果：正常人PBMCS未测到NFK B结合活性，糖尿病病人PBMCS 中 NF－K B的结合活性增加，其中在血糖控制不良及脂代谢紊乱、合 升大血管并发症的＊M病人P＊＊C升中N卜。B结合活。件最强。 结论：＊F一。B是糖尿病大刑－拧并发症形成的－个早期反应指 标，NF—K B的活化与高血糖和高脂悦症有关。因此，严格控制血枷 和血脂是预防糖尿病大血管病变的基础。 第三部分。重组腺病毒 Ad。B a M转染对人脐静脉 内皮细胞功能的影晌 目的：探讨 NF一。B的超抑制物 Ad。B a M基因转染对人脐静 重庆医科大学博士研究生学位论文 脉内皮细胞（HUVEC）功能的影响。 方洁：用MTT法，3H—TdR掺入法及流式细胞检测仪测定重组“腺病毒 Adl。B a M转染 HU’VEC细胞对其增殖的影响。通过腺病毒 载体将 W一。B的超抑制物 Ad。B a M重组基因转染 HU’VEC，采 用免疫组织化学方法及凝胶电泳迁移率方法分别检测转染HUVEC细 胞核转录因于 NF一。B的表达及 DNA结合活性。Western Blot方法 检测转染 HUVEC细胞 IK B Q的表达情况。RT—PCR方法及免疫组 织化学方法检测转染HUVEC细胞ICAM—l及MCP—l的表达。 结果：重组腺病毒感染滴度为＊5 XIOvfo／ml。随着 MOI的增高， 阳性感染的 HUVEC数量增多。l。B a的表达在转染 Adl。B o M的 细胞中明显高于未转染的细胞，在高糖刺激组转染 Adl B Q M的细 胞也明显高于高糖刺激的未转染的细胞，说明重组腺病毒能有效地将 IK B Q超抑物转导入 HUVEC细胞，并能抑制高糖刺激因素介导的 1 。Ba的蛋白水解作用。 高糖培养可抑制 HUVEC细胞的生长，Adl。B a M转染对 HUVEC 细胞生长无影响，且能促进高糖环境下内皮细胞的生长。高糖可以刺 激 HUVEC细胞 NF—K B的 DNA结合活性，并促进其 ICAM—l及 MCP—l的表达