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目的:肿瘤异质性的表现形式复杂多样,即使是同种类型肿瘤,不同个体之间、同一个体所处不同病理时期都可能会表现出巨大的差异,这给肿瘤的早期诊断、治疗及预后带来了极大的挑战。从肿瘤异型性,特别是从不同分期、分化的角度去认识和研究其内在相关分子机制,应用蛋白质组学及生物信息学方法,对临床不同分化程度的肝癌组织进行分子机制研究非常必要。为肝细胞肝癌发生、发展相关肿瘤分子标志物的筛选,深化对肝癌发生的分子机制的认识及改善肝癌患者的诊断及治疗手段提供实验数据及理论依据。方法:收集兰州大学第一医院手术切除的新鲜肝癌组织,乙肝表面抗原阳性,经病理诊断分为高分化组、中低分化组各20例。提取不同分化程度肝癌组织的总蛋白并进行蛋白定量测定,应用蛋白质组学双向凝胶电泳技术分离蛋白并对差异蛋白质进行MALDI-TOF-MS质谱分析鉴定,得出肝癌分化异质性表达过程中相关蛋白质的表达特点,并通过系统生物学的生物信息进行差异蛋白质的功能通路预测,结合免疫组织化学法对相应组织的病理切片进行染色验证。检测它们是否与蛋白质组学方法检测结果一致以及在不同分化程度的肝癌组织中的表达趋向。结果:成功鉴定差异蛋白质11个。其中在中低分化HCC组高表达的有:过氧化物还原酶2(Peroxiredoxin-2,PRDX2),热休克蛋白β-1(Heat shock protein beta-1,HSPB1),烯酰辅酶A水合酶(Enoyl-CoA hydratase,mitochondrial,ECHM),结合珠蛋白(Haptoglobin,HPT),膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2),谷胱甘肽S转移酶ω-1(Glutathione S-transferase omega-1,GSTO1);在高分化HCC组高表达的有:钙网织蛋白(Calreticulin,CALR),果糖二磷酸醛缩酶A(Fructosebisphosphate aldolase A,ALDOA),纤维蛋白原β链(Fibrinogen beta chain,FIBB),血清转铁蛋白(Serotransferrin,TRFE),血红蛋白β亚基(Hemoglobin subunit beta,HBB)。经过生物信息通路分析:差异蛋白涉及热激蛋白调控、多种信号通路的调控、免疫应答调控等。通过String蛋白相关性分析选取其中4个相关性较强的蛋白,进一步进行免疫组织化学病理切片染色验证,结果显示:与蛋白质组学研究所得结果一致,过氧化物氧还原酶2(PRDX2),热休克蛋白β-1(HSPB1),膜联蛋白A2(ANXA2)在中低分化组中相对高表达;钙网织蛋白(CALR)在高分化组中相对高表达。结论:证实了膜联蛋白A2(ANXA2)、热休克蛋白β-1(HSPB1)、过氧化物还原酶2(PRDX2)在中低分化肝细胞肝癌组织的高表达提示高侵袭的特性,可能作为早期监测肝癌侵袭、转移的生物学标志物。钙网织蛋白(CALR)在高分化肝细胞肝癌高表达其机制可能与CALR介导的免疫吞噬有关,并可能成为潜在的肝癌基因治疗靶点。