论文部分内容阅读
麝是我国极其重要的资源动物。由于野外乱捕滥猎和栖息地的不断破坏，我国麝类数量急剧减少、现存麝类已面临濒危。本研究对林麝的核型、染色体G-带带型、林麝微卫星DNA的分离和多态性进行了研究，并对野生和圈养林麝群体的遗传多样性进行了分析。
本研究以林麝外周血淋巴细胞为实验材料，首先建立了适合林麝淋巴细胞增殖的培养体系，即在RPMI1640综合培养基中加入等量的植物血球凝集素PHA和伴刀豆球蛋白ConA，38℃培养。利用此法培养的细胞用于制备染色体，确定林麝核型是2N=58，且全都是端着丝粒染色体。本研究还首次应用染色体G-带技术，对林麝染色体的G-带带型进行了研究。结果表明，林麝核型中，最长的一条染色体是X染色体，最短的是Y染色体。
由于微卫星标记方法的可靠性和特异性，本研究首先构建了3个林麝基因组微卫星富集文库，即(AC)n文库、(AAG)n文库和(GATA)n文库，每个文库含有上万个转化子。
利用分离到的林麝微卫星DNA对其多态性及在圈养林麝中的应用进行了研究。首先用蛋白酶K、酚/氯仿提取林麝毛囊DNA，每个毛囊提取的DNA约为4～9ng，可用于限制酶切、基因和微卫星座位的扩增。然后对分离得到的林麝微卫星座位进行进一步的筛选和PCR反应条件优化，最后对米亚罗野生林麝和都江堰金凤山及马尔康圈养林麝的遗传多样性进行了研究。微卫星多态性研究结果发现，从林麝中分离到8个稳定的、具有高度多态性的微卫星分子标记。研究结果对林麝保护措施的制定提供了最直接的理论依据，因此在本文中还提出了保护好圈养林麝种群的管理措施。