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锦鲤疱疹病毒病是由鲤疱疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus3，CyHV-3）感染各日龄锦鲤、鲤鱼包括鲤鱼的普通变种（比如框镜鲤）,引起锦鲤、鲤鱼烂鳃病和高死亡率的新病毒病，已引起世界各国的高度关注。锦鲤疱疹病毒病造成的鱼类死亡率高达80-100%，具有高度的传染性，是一类烈性传染病，一旦爆发疫情难以控制。1998年此病在以色列首次发现，随后在全世界十几个国家和地区传播与流行，造成巨大的经济损失。鲤鱼养殖是我国的传统养殖项目，数量多，分布广。锦鲤疱疹病毒病在国内发病频繁，加之运输和商业繁荣，若疫病一处暴发，很快危及整个地区乃至全国的鲤鱼养殖行业，甚至其他淡水鱼类的养殖，造成整个鲤鱼养殖链的瘫痪，给我国的进出口贸易和国民经济带来的损失不可估量。2007年，国家质检总局发布预报，加强对进口锦鲤和鲤鱼的监测力度，要求在进出口贸易活动中把锦鲤疱疹病毒病作为必检项目。目前的研究成果显示，免疫疫苗是防治锦鲤疱疹病毒病的有效方法，但是我国目前还没有研制出确实、有效的疫苗，在锦鲤疱疹病毒病疫苗研制方面还处于摸索阶段。文献报道，该病的诊断方法有多种。临床应用比较普遍的是通过临床症状以及剖检变化、简单的病理分析等做出初步的诊断，最终确诊需应用实验室诊断方法，包括病毒分离培养技术、间接酶联免疫吸附试验、原位杂交技术、扫描电镜技术、聚合酶链式反应及环介导等温扩增法等。以上方法各有优缺点，有的敏感性和特异性差，有的确诊流程过于繁琐，有的假阳性率比较高，有的还存在环境污染等问题而难以满足临床检测的需求。因此，全面、有效地控制锦鲤疱疹病毒病，加强对本病的监测力度，提高对锦鲤疱疹病毒病的检出率，研制针对鲤疱疹病毒3型的高效、特异的检测方法迫在眉睫。临床上对鲤疱疹病毒流行病的调查急需建立一套敏感、特异、成本低、检样量大的快速检测技术，这样才能够准确、及时地反应该病流行病学特点，尽可能地满足进出口贸易的要求。本着提高检出率和检样量以及降低检测成本的临床需求，本研究首先针对流行毒株的保守基因ORF108，建立了SYBR Green I CyHV-3实时荧光定量PCR检测方法。利用ORF81基因PCR产物构建了重组质粒pMD18-T-81作为实时荧光定量PCR的标准品，试验证明所构建的标准品具有稳定性高和重复性好的特点。特异性检验显示所建立的SYBR Green I CyHV-3实时荧光定量PCR具有良好的特异性；重复性试验显示鲤疱疹病毒3型实时荧光定量PCR对4.1×107、4.1×106、4.1×105浓度阳性质粒的变异系数（CV）分别是0.95%、0.83%和0.85%，具有良好的稳定性。通过对SYBR Green I CyHV-3实时荧光定量PCR和普通PCR检测灵敏性的比较，结果显示荧光定量PCR可以检测出10个TCID50/100μL的病毒量，比普通PCR检出量高出一个数量级。其次，本研究利用建立的实时荧光定量PCR检测方法对吉林省部分地区的锦鲤疱疹病毒病进行了流行病学调查。通过调查发现，锦鲤疱疹病毒病发病越来越早，水温在13-15℃即发病。发病鱼主要为成鱼，同一渔场内和鱼塘相互传染，几乎同时发病，呈急性大规模死亡。网箱养殖的发病率高死亡率也高，在鸭绿江一条支流上所有网箱养殖鲤鱼均发病且发病率死亡率差别不大。池塘养殖的发病率和死亡率相对较低，可能与养殖密度相关，养殖密度低则发病率也低。对采集的139份样品用建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法进行检测，其中阳性样品为96个，阳性检出率为69%，将一部分阳性PCR产物测序，测序结果在NCBI上进行Blast分析，结果与标准株同源性为在98-100%之间。选20份用常规PCR检测为阴性的样品用荧光定量PCR检测，其中6份呈阳性。证明建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法比本实验室建立的常规PCR检测方法更加敏感和准确。利用建立的荧光定量方法检测DNA疫苗（pIRES-ORF81）在鲤鱼体内的代谢及组织分布情况。鲤鱼肌肉注射重组质粒pIRES-ORF811ug，24h后在鲤鱼体内各个器官均能检测到重组质粒的存在,且质粒拷贝数均为检测组织最高水平。随着时间的延长各组织质粒浓度都在减少。第6周时鲤鱼的肝胰脏和肠道内已经检测不到DNA。DNA疫苗在肌肉中的检出率和检出量始终是最高的，在第6周后仍能检测到9×104个拷贝，其次是血液、肾脏、脾脏、肠道、肝胰脏。肝胰脏的检出率和检出量最低，第6周已检测不到。为获得能够检测鲤疱疹病毒3型的阳性抗血清，本研究利用CyHV-3中国吉林株（KHV-CJ）基因组为模板进行PCR，扩增获得了CyHV-3ORF108基因并构建了原核表达重组质粒pET32a-108，将构建的重组质粒pET32a-108在大肠杆菌BL21菌中获得表达，将表达产物免疫小鼠，收集血清。经过ELISA试验确认，初步证实表达产物的鼠源抗体能够和病毒反应。试验证明，pET32a-108表达的目的蛋白所制备的血清,可以作为建立免疫学检测技术的抗体来使用。