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菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)是我国十大传统名花之一,而菊花白色锈病是危害栽培菊花生产的首要病害之一,并在菊花上广泛传播,已列入世界性检疫病害。课题组前期对抗、感品种进行了转录组测序,获得了差异表达基因,CmHSP、CmHSPL基因和CmWRKY基因。本研究利用实时荧光定量PCR技术,分析这三个菊花抗病相关基因在不同胁迫下表达模式;同时构建pBI121-CmWRKY植物表达载体并转化农杆菌,为基因功能验证奠定基础,对菊花抗病或抗逆品种的选育具有指导意义。主要的试验结果如下:1.利用实时荧光定量PCR技术,对菊花在非生物胁迫(高盐、干旱、高温、低温)处理后的基因表达模式进行分析。结果表明,CmHSP和CmHSPL基因以及CmWRKY基因的表达受高盐和高温胁迫诱导明显,高盐处理0.5 h时,三个基因表达量分别是对照组的1.6倍、2.5倍、6.6倍;高温处理0.5 h时,三个基因的表达量分别是对照组的368.7倍、15.1倍、13.2倍。植株受低温胁迫时,CmHSP和CmHSPL基因以及CmWRKY基因的表达均呈现下调,说明低温胁迫抑制了菊花这三个基因的表达。干旱胁迫抑制CmHSP和CmHSPL基因表达,而CmWRKY基因受其诱导表达不明显。2.利用实时荧光定量PCR技术,对菊花在植物激素(乙烯利Eth、水杨酸SA、茉莉酸甲酯MeJA)处理后的基因表达模式进行分析。结果表明,CmHSP和CmHSPL基因受SA和MeJA诱导响应明显,而受Eth诱导响应不明显。CmWRKY基因的表达受Eth,SA和MeJA诱导响应迅速,均在处理后1 h时CmWRKY基因的表达量达到最高。3.利用实时荧光定量PCR技术,对菊花在生物胁迫(菊花白色锈病病原菌)处理后的基因表达模式进行分析。结果表明,CmHSP和CmHSPL基因以及CmWRKY基因受菊花白色锈病菌的生物诱导,表达量较高,响应迅速,均在处理6 h内完成高量表达。CmHSP和CmHSPL基因分别于处理4 h时和6 h时表达量达到最高,为对照组的21.1倍和10.4倍;而CmWRKY基因在1 h时表达量即达到最高值,为对照组的426倍。4.成功构建植物重组表达载体pBI121-CmWRKY,用冻融法将构建成功的重组质粒pBI121-CmWRKY转化到农杆菌中,为获得转基因植株奠定基础。