慢病毒载体的构建及其介导的表达GFP的神经干细胞移植于脊髓损伤后的迁移和存活

来源 :首都医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiguso198735
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:用4质粒表达系统构建来源于人类免疫缺陷病毒(Human Imunodeficiency Virus-1,HIV-1)的表达绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein,GFP)的慢病毒载体(lentiviral vectors,LV),标记大鼠脊髓神经干细胞并进行体内移植,观察神经干细胞在体内的迁移与存活。   方法:4质粒系统中,包装质粒含巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子和来自胰岛素基因的Poly(A)位点;包膜质粒编码水泡性口炎病毒-G糖蛋白(vesicular stomatitis virus-G glycoprotein,VSV-G);转移质粒含标志基因GFP;REV质粒含rev。用磷酸钙沉淀法将4质粒共转染来源于人胚肾细胞系的包装细胞——293T细胞,36小时后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,收集病毒上清超速离心浓缩收集。将LV转染HeLa细胞检测其感染能力。用p24-ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定慢病毒载体的浓度。用表达GFP的慢病毒载体转染大鼠脊髓神经干细胞,以PLGA为支架移植入大鼠T9段半横断脊髓损伤处。移植后1个月在荧光显微镜下观察神经干细胞在脊髓内的迁移,并计算其存活率。   结果:转染293T细胞后在荧光显微镜下观察到很强的绿色荧光,表明成功构建了表达GFP的慢病毒载体的4质粒表达系统。慢病毒载体感染的HeLa细胞有很强的GFP表达。感染的大鼠脊髓神经干细胞球表达强烈的绿色荧光。神经干细胞移植于脊髓后1个月,在损伤脊髓的头端和尾端都可见GFP阳性细胞。计算出的存活率为:1.4911±0.0313%。   结论:成功构建了表达GFP的慢病毒载体的4质粒表达系统,其标记的神经干细胞移植入大鼠损伤脊髓后向脊髓组织内迁移并有少数存活。
其他文献
目的:观察、分析中西医结合治疗心血管疾病伴焦虑症的临床应用效果.方法:特选取来我院就诊的150例心血管疾病伴焦虑症患者作为研究对象;随机进行分组,分为对照组和实验组.每
教学中使用恰当的教学策略,实现“有效教学”,应把握好教学导入及探究的时机和空间,激发学生的学习兴趣和探究意识;提炼问题的基本模型,提高解题教学的有效性。
在第一章绪论和第二章对微波MCM技术进行综述后,第三章提出了一种有效的微波MCM的频域模拟方法-参数综合法.该方法以微波网络理论为基础,将电路分为各个子网络,并将它们的连
目的:观察喹硫平合并静脉滴注丙戊酸钠治疗双相情感障碍混合发作的疗效.方法:随机选取符合ICD-10双相情感障碍混合发作诊断标准的患者32例,治疗观察2周.在入院日(基线)、入院
目的:石韦散加减治疗石淋病下焦湿热证的临床疗效观察.方法:选择在2014年-2018年期间在我科住院及门诊的60例石淋病下焦湿热证患者为研究对象,其中对照组30例子西医解痉止痛
目的:分析和探讨妇产科良性疾病查治中经阴道超声与腹部超声的运用.方法:选择从2018年7月-2019年6月在我院接受治疗的妇产科疾病患者90例为研究对象,经病理学检查及其它检查
该文对分级式DRC的算法进行研究,并据此开发了一个分级式DRC系统-HDRC.HDRC系统针对广泛存在于现代集成电路版图中的Array结构的特点,采用了一系列处理Array的优化措施.对于A
射频微电子机械(RF MEMS)谐振器具有高频率、高品质因子(Q)、小尺寸、低功耗、可与集成电路(IC)单片集成等优势,被认为是传统石英和陶瓷谐振器的理想替代品,在无线通信系统中具
跨界设计在当下仿佛就是时尚的代名词,特别是当众多设计明星纷纷与各大品牌合作,不断推出的绚烂的明星产品,跨界设计已然成为设计师们的创新手段与推动品牌的强力效应。而我
该文利用平面板块元法对典型涂覆型目标散射矩阵的计算进行了研究,对极化基础理论及最优极化分析方法进行了全面深入的讨论,并结合具体的涂覆型典型目标(包括平板,圆柱体,圆