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第一章EphA2在头颈鳞癌中的表达及其临床意义目的：检测促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2) mRNA及蛋白在头颈部鳞状细胞癌(头颈鳞癌)组织及细胞株中的表达,并探讨其表达与头颈鳞癌临床病理特征和预后之间的关系。方法：采用免疫组织化学技术检测EphA2蛋白在98例头颈鳞癌石蜡组织标本中的表达,并统计分析EphA2蛋白与头颈鳞癌临床病理特征和预后之间的关系；另外,运用RT-PCR及Western blot检测EphA2mRNA及蛋白在13例配对头颈鳞癌组织及癌旁黏膜组织和头颈鳞癌细胞株中的表达。结果：EphA2mRNA及蛋白在头颈鳞癌细胞株及组织中的表达均上调,且EphA2蛋白的表达与头颈鳞癌的肿瘤发生位置(P=0.018)、T分级(T1+T2/T3+T4)(P=0.016)、临床分期(Ⅰ期+1Ⅱ期/Ⅲ期+ⅣV期)(P=0.001)、转移(P=0.002)及复发(P=0.002)密切相关；Kaplan-Meier生存分析结果显示EphA2高表达组与低表达组5年无瘤生存率分别为27.8%与64.1%,5年总生存率分别为38.9%和82.1%,差异具有统计学意义(P均<0.05)；多因素Cox比例风险回归模型进一步显示,EphA2表达水平为头颈鳞癌预后的独立影响因素(P=0.006)。结论：EphA2在头颈鳞癌组织及细胞中表达显著升高,且其高表达与头颈鳞癌患者的复发、转移及预后密切相关。这些结果均提示EphA2可能在头颈鳞癌的发生、发展中可能发挥了重要作用,并对头颈鳞癌复发、转移及预后具有评估价值。第二章EphA2调控头颈鳞癌细胞生长及侵袭转移的体外实验研究目的：研究表明EphA2在多种实体瘤中高表达,且我们前期研究表明EphA2蛋白在头颈鳞癌组织中显著上调,并与头颈鳞癌患者的临床分期、复发、转移及预后密切相关。因此,该部分将沉默EphA2在头颈鳞癌细胞株中的表达,并观察EphA2基因沉默后对头颈鳞癌细胞体外生长、凋亡、运动、侵袭能力生物学行为的影响。方法：利用慢病毒介导的EphA2shRNA沉默头颈鳞癌Tu686细胞中EphA2的表达,RT-PCR及Western blot技术检测EphA2基因的沉默效果；嘌呤霉素筛选EphA2基因稳定沉默的Tu686细胞；通过CCK-8法、流式细胞技术、划痕实验及Transwell侵袭实验观察EphA2沉默后对Tu686细胞的体外生长能力、细胞周期分布、凋亡率、迁移及侵袭能力的影响。结果：慢病毒介导的EphA2shRNA成功抑制了Tu686细胞中EphA2的表达。与对照组Tu686及Tu686EPhA2RNAi-细胞比较,实验组Tu686EPhA2RNAi+细胞增殖能力减弱,处于G0/G1期的细胞比率显著增多(75.04±1.08vs56.09±1.58,55.04±1.38),而处于S期(18.33±0.77vs32.54±1.70,32.66±0.99)和G2/M期(6.64±1.00vs12.30±0.76,11.37±0.87)的细胞比率显著减少(P均<0.01),而凋亡率无显著统计学差异(P>0.05)。划痕48h后Tu686EPhA2RNAi+细胞愈合率仅(46.7±7.6)%,而对照组Tu686和Tu686EPhA2RNAi-细胞的创面愈合率则达到(88.7±4.5)%与(86.0±2.6)%,具有显著统计学差异(P<0.01)。Transwell侵袭实验发现48小时后穿过Transwell聚碳酸酯膜的Tu686EPhA2RNAi+细胞较两对照组明显减少(123±13vs288±20,303±11)(P<0.01)。结论：EphA2表达抑制后能减弱头颈鳞癌Tu686细胞的体外增殖、迁移及侵袭能力,提示其在头颈鳞癌的恶性进展中发挥了重要作用。第三章EphA2调控头颈鳞癌细胞生长及侵袭转移的体内实验研究目的：进一步从体内实验证实组织及细胞水平的实验结果,并利用所获得的移植瘤组织标本对EphA2引起头颈鳞癌颈淋巴结转移的作用机制进行初步探讨。方法：利用慢病毒介导的shRNA沉默EphA2在高转移性头颈鳞癌细胞株M2中的表达；嘌呤霉素筛选稳定克隆,RT-PCR及Western blot技术检测EphA2沉默效果；构建头颈鳞癌高转移动物模型,通过HE染色验证其成瘤及颈淋巴结转移情况；免疫组织化学技术检测移植瘤微血管密度；Western blot技术检测移植瘤标本中EphA2及血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果：筛选出EphA2基因稳定沉默的M2细胞,并成功构建头颈鳞癌高转移动物模型,成瘤率达100%。实验组M2EphA2RN Ai+细胞移植瘤较对照组M2及M2EPhA2RNAi-细胞移植瘤体积减少63.5%-69.4%,重量减轻51.8%-60.0%,颈淋巴结转移率亦减少(21.4%vs66.7%,58.3%；P<0.05)。Western blot显示实验组移植瘤组织中EphA2及VEGF蛋白显著下调,免疫组织化学技术发现实验组瘤体微血管密度显著减少(P<0.01)。结论：EphA2沉默后抑制头颈鳞癌细胞在动物体内的生长及转移；并能明显减少头颈鳞癌组织内的肿瘤新生血管,且该肿瘤新生血管的抑制可能与促血管生成因子VEGF的减少有关。