论文部分内容阅读
氯霉素是一种广谱性抗生素,在畜牧业中常用于动物传染性疾病的治疗,摄入含氯霉素的食品会对人体健康造成危害,我国已将其已列为禁用药物,规定动物性食品中不得检出。目前针对氯霉素的检测方法主要使用气相色谱法,由于其样品前处理繁琐、耗时长、单个样品成本高等缺点不适于大量的样品和现场快速检测。免疫分析法作为一种高效灵敏的快速检测方法能弥补这些不足,作为初筛方法,更具应用价值。针对此,本文开展了氯霉素胶体金免疫层析试纸条的研究,主要研究内容和结果如下:(1)研制了氯霉素胶体金试纸条。通过优化确定CAP试纸条的最佳工艺条件:标记pH9.0(用量4μL 0.1 mol/L K2CO3/mL胶体金溶液),抗体标记用量6.0μL/mL胶体金,离心速度8000 r/min,离心时间10min,金标抗体复溶稀释至原体积1.1倍涂布在结合垫上烘干,NC膜T线上包被抗原浓度1 mg/mL(稀释4倍)、C线上二抗(羊抗鼠)浓度0.8 mg/mL,将以上制备材料组装试纸条。(2)建立氯霉素胶体金定量检测方法。本方法结合免疫层析读数仪,对氯霉素(CAP)检测线性范围为(IC20-IC80)0.32.88μg/L,IC50为0.78μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.18μg/L。该试纸条检测限为2μg/L,与氟甲砜霉素、氯霉素碱、甲砜霉素、甲基氯霉素、氟苯尼考无交叉反应,在37℃下放置3天、室温下放置4个月有效。(3)实际样品的检测。本研究建立的胶体金定量检测方法优势明显,与ELISA检测结果基本一致,线性系数为0.9647;鸡肉和猪肉分别同HPLC-MS检测方法进行对比,线性系数分别为0.9992和0.9996,相关性良好。选取了市售的3份猪肉和3份鸡肉样品,分别用HPLC-MS与GICA方法进行检测,结果显示有一份鸡肉样品为阳性,其他均为阴性样品,两种检测方法结果基本一致,进一步表明本研究建立的胶体金方法准确可靠。