论文部分内容阅读
【目的】（1）检测肝癌组织中驱动蛋白Eg5的表达及与肝癌临床病理特征的相关性。（2）分析不同转移潜能的肝癌细胞株中驱动蛋白Eg5的表达情况，探讨其与肿瘤转移之间的关系。（3）研究Eg5靶向药物S-三苯甲基－L－半胱氨酸（S-Trityl-L-Cysteine,STLC）在不同转移效能肝癌细胞系中的抗肿瘤效应及其致凋亡的机制。【方法】（1）通过免疫组织化学染色检测肝癌组织中驱动蛋白Eg5的表达并分析其与肝癌临床病理的相关性。（2）运用免疫组织化学染色检测不同转移潜能肝癌细胞株中驱动蛋白Eg5的表达，RT-PCR的方法分析驱动蛋白Eg5mRNA在有无门脉癌栓的肝癌组织及三种不同转移潜能的肝癌细胞株中的表达水平，运用Western Blot方法检测不同转移潜能肝癌细胞株中驱动蛋白Eg5的蛋白表达水平，分析其与肝癌转移之间的相关性。（3）将肝癌细胞株MHCC97H分成不加药组和不同剂量（1、5、10、50、100μmol/L）STLC加药组分别作用24h，48h，72h，MTT法检测STLC对肝癌细胞的抑制效应，运用RT-PCR的方法检测药物处理前后MHCC97H细胞中细胞凋亡相关因子BIM和AIF mRNA的表达水平，免疫荧光双染分析BIM和AIF在细胞质与细胞核间转移的情况，运用比色法测定caspase3的活性。【结果】（1）免疫组织化学方法显示Eg5主要表达在细胞质中，Eg5在正常的肝脏组织中未见明显表达，在肝癌组织中的表达阳性率为62.3%（33/53）,且与肝癌的肿瘤直径（χ~2=10.162，P=0.002）、Edmondson分级(χ~2=4.414，P=0.038)、pTNM分期（χ~2=13.061， P=0.000）和有无门脉癌栓（χ~2=4.098，P=0.041）有关；而与患者性别、年龄、肿瘤包膜有无等指标无明显的相关性（P>0.05）。（2）免疫细胞化学示Eg5在MHCC97H、SMMC7721、HepG2三种肝癌细胞株中均表达；其中MHCC97H表达最强、SMMC7721次之；HepG2表达最弱；不同转移潜能的人肝癌细胞株中Eg5mRNA和蛋白表达量存在明显差异，随着细胞株转移潜能的逐步增加Eg5表达量呈升高趋势： HepG2<SMMC7721<MHCC97H。Eg5mRNA在炎性假瘤的肝组织中未见明显表达，在肝癌组织中表达水平明显增高，且有门脉癌栓的肝癌组织比无门脉癌栓的肝癌组织表达水平更高。三者之间的差异均有统计学意义（P<0.05）。(3) MTT实验显示STLC抑制MHCC97H细胞生长并致其凋亡；免疫荧光染色见核破裂及凋亡小体和细胞体积增大等典型有丝分裂灾变细胞凋亡现象；免疫荧光双染显示BIM和AIF存在细胞质到细胞核的转移，RT-PCR检测发现药物作用48小时后BIM和AIF mRNA表达明显增强(P<0.05)，比色法检测显示药物作用后caspase3的活性升高(P<0.05)。【结论】驱动蛋白Eg5在肝癌组织和肝癌细胞株中高表达，其表达水平随着肝癌转移活性的提高而增强，驱动蛋白Eg5可以作为肿瘤治疗的新的靶点。靶向药物S-Trityl-L-Cysteine具有良好的致肝癌细胞凋亡的效应，BIM和AIF可能协同caspase3共同参与STLC致肝癌细胞凋亡中的过程。